自1979年發(fā)明以來，Western Blot（WB）已成為生命科學(xué)領(lǐng)域最常用的研究方法之一，它是一種公認(rèn)的、基于構(gòu)建抗體-蛋白質(zhì)復(fù)合物的蛋白質(zhì)檢測(cè)與分析技術(shù)。今天，請(qǐng)各位隨小編一探WB的奇妙世界，我們來一起分析它最讓我們“糾結(jié)”的操作點(diǎn)，并找出解決方法！

首先，一個(gè)經(jīng)典的WB流程長(zhǎng)成這樣——

其次，我們?cè)谧鯳B時(shí)最常遇到的問題也是驚人的相似——樣品漂浮、蛋白條帶扭曲（無(wú)法準(zhǔn)確判斷蛋白分子量）、轉(zhuǎn)膜后看不到帶藍(lán)色或橙色的指示條帶、抗體孵育不均勻?qū)е缕毓舛炔町惡艽螅ㄒ廊皇菚?huì)影響到蛋白表達(dá)量的估算）。

 

這些問題其實(shí)都或多或少與樣品前處理有關(guān)。也就是說，我們完全可以通過優(yōu)化樣品處理手法，以及經(jīng)驗(yàn)累積，來獲得完美的WB結(jié)果。

表1：Western Blot常見問題分析

表2：德國(guó)IKA蛋白質(zhì)免疫印跡套裝（產(chǎn)品詳情請(qǐng)見www.ika.cn）

表2中的產(chǎn)品簡(jiǎn)介如下，德國(guó)品質(zhì)，始終如一，值得您信賴——

* T10 標(biāo)準(zhǔn)型套裝：高速均質(zhì)機(jī)，用于分散組織于緩沖液，可選配一次性分散頭，避免反復(fù)清潔導(dǎo)致的交叉污染

* DBH 1：金屬浴，用于迅速升溫的加熱反應(yīng)，標(biāo)配PT 1000.60溫度傳感器，可準(zhǔn)確測(cè)量溫度并在大數(shù)顯屏上顯示，方便同時(shí)觀察設(shè)定溫度和實(shí)際溫度，帶有計(jì)時(shí)功能

* ICC basic eco 18：恒溫水浴，二元一體泵可確保極佳的升溫速率和溫度均一性，透明浴槽方便觀察，智能的高、低液位報(bào)警方便日常操作

* Vortex 2：渦旋振蕩器，用于劇烈混勻，可選配多種夾具，持久耐用，并可在振蕩多個(gè)EP管、試管時(shí)解放您的雙手，機(jī)身堅(jiān)固穩(wěn)定，避免移動(dòng)產(chǎn)生撞擊風(fēng)險(xiǎn)

* KS 260基本型：振蕩搖床，混勻直徑10 mm，實(shí)際工作轉(zhuǎn)速范圍50 – 500 rpm，在低轉(zhuǎn)速下可長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定運(yùn)行，完全滿足生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室的多種振蕩需求，可靈活選配多種夾具