質譜掃描SARS-CoV-SNP二維碼鑒定新冠與薩斯
2021年5月11日獲國家發明專利
中國檢驗檢疫科學研究院與北京萬泉麟科技有限公司合作,于2020年8月研發《質譜掃描SARS-CoV-SNP》,成功用于模擬SARS-CoV和SARS-CoV2病毒的檢測與鑒定,并于2021年5月11日獲得國家知識產權局授予發明專利授權ZL202010874232.5。
為了快速應對突如其來的SARS相關冠狀病毒物種的襲擊,有必要研發“一種能夠通過SNP檢測和鑒定SARS相關冠狀病毒的通用試劑盒”,該試劑盒不僅能夠超高靈敏度精確檢測和區分已有的SARS-CoV和SARS-CoV-2病毒,而且還能夠用于對未來可能發生的新型冠狀病毒SARS-CoV-3,4,n進行迅速、有效、及時的監控和預警,為人類預防未來新型冠狀病毒及其變種再次來襲,提供強有力的快速偵測工具。
經幾千例SARS-CoV相關病毒全基因組DNA條形碼序列分析,從10個基因區域( 5UTR, L, RdRp, ZD, S, EC3, M, N, O10, 3UTR )中篩選出能夠區分SARS-CoV與SARS-CoV2的種特異性SNP保守位點,建立SARS-CoV相關病毒DNA二維碼識別標志。(見表1)
表1. SARS-CoV相關病毒DNA二維碼識別標志
注:設計十組引物和探針,分別靶向以上10個SNP位點。
采用多重PCR-MS精細測序。根據四堿基單點延伸組合,區分SARS-CoV與SARS-CoV-2,并預測未來可能出現的SARS-CoV-3,4,….n,真正做到防患于未然。(見圖1)
圖1. RdRp SNP檢測質譜圖
注:1. 左圖:RdRp 探針峰為6381.1 Da,經單堿延伸反應后未移動為陰性;2、中圖:經單堿延伸后,峰移至6652.4 Da即A堿基工作,為SARS-2
3、右圖:經單堿延伸后,峰移至6668.4Da 即G堿基工作,SARS-CoV
4、當出現C/T時,則預示出現新SARS-Cov-n
目前獲得CFDA批準的商用試劑盒,有單靶區段(ORF1ab)、雙靶區段(ORF1ab、N蛋白)、三靶區段(ORF1ab、N蛋白和E蛋白)的試劑,用于檢測SARS-CoV-2。
本發明的創造性在于,使用一套引物探針,同時檢測兩種完全不同種的病毒,不僅節省了合成引物的檢測成本,而且大大提高了檢測靈敏度,相當于一次對一個樣本作了10次單色PCR,5次雙色PCR, 2.5次4色PCR。不僅可以提高檢測易變異和降解的RNA病毒的靈敏度,有效避免目前商用試劑1-2探針PCR檢測引起的低載量SARS-CoV-2病毒漏檢。而且可以用于對未來可能再次來襲的新SARS-CoV-3,4 …n,進行預警。(見圖2)
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SARS-CoV2 positive report |
SARS-CoV positive report |
圖2. 質譜掃描自動報告結果
在此發明之前,眾所周知PCR-MS法定義為只能用于檢測已知序列,不能用于檢測未知。而本發明第一次提出能夠用于預測未知物種的發生,將PCR-MS質譜精細測序的作用發揮到了一個嶄新的階段。
中國檢驗檢疫科學研究院是國家設立的公益性檢驗檢測檢疫中央研究機構,主要任務是開展檢驗檢測檢疫應用研究,以及相關基礎、高新技術和軟科學研究,著重解決檢驗檢測檢疫工作中帶有全局性、綜合性、關鍵性、突發性、基礎性的科學技術問題,為國家檢驗檢測檢疫決策、市場綜合監管和質量安全提升提供技術支持。
北京萬泉麟科技有限公司專一致力于基于質譜的病原微生物檢測試劑盒研發與服務,擁有自主知識產權的《質譜掃描病原體MasScan®Pathogens》和《質譜掃描SNP二維碼分型MasScan
® SNP2D》系列產品,重點關注與人類癌癥息息相關的“18種生物致癌因子”和“65種α屬粘膜皮膚高危HR-HPV及54種β屬皮膚致癌致疣HPV”等檢測。