德國IKA推出蛋白質免疫印跡套裝“姐妹花”工具包
Western Blot所需要的工具包，就在這里
——德國IKA蛋白質免疫印跡套裝“姐妹花”
——德國IKA蛋白質免疫印跡套裝“姐妹花”
自1979年發明以來，Western Blot（WB）已成為生命科學領域最常用的研究方法之一，它是一種公認的、基于構建抗體-蛋白質復合物的蛋白質檢測與分析技術。今天，請各位隨小編一探WB的奇妙世界，我們來一起分析它最讓我們“糾結”的操作點，并找出解決方法！
首先，一個經典的WB流程長成這樣——
其次，我們在做WB時最常遇到的問題也是驚人的相似——樣品漂浮、蛋白條帶扭曲（無法準確判斷蛋白分子量）、轉膜后看不到帶藍色或橙色的指示條帶、抗體孵育不均勻導致曝光度差異很大（依然是會影響到蛋白表達量的估算）。
這些問題其實都或多或少與樣品前處理有關。也就是說，我們完全可以通過優化樣品處理手法，以及經驗累積，來獲得完美的WB結果。
表1：Western Blot常見問題分析
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常見問題 |
原因分析 |
解決方法 |
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樣品漂浮 |
樣品中含有未除凈的溶劑或雜質，其密度比電泳緩沖液小 |
處理組織或菌體時，需充分分散或裂解，確保目的蛋白盡可能的釋放；
熱處理粗樣時，確保升溫迅速，并且金屬浴或水溫的實際溫度達到100℃（在海拔較高處水的沸騰不能確保溫度）；
離心的轉速和時間足夠；
吸取上清液時盡量不要碰到中間層
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蛋白條帶扭曲 |
分離膠的濃度與蛋白分子量不對應；灌膠時間過長或過短，導致丙烯酰胺的交聯度不均勻 |
根據目的蛋白的分子量選擇正確的分離膠濃度；
制備分離膠與濃縮膠時，應保證緩沖液母液的正確稀釋，以及各組分的充分混勻（僅用移液器吹吸是不夠的，最好可以迅速用磁力攪拌器進行混勻）
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轉膜后沒有指示條帶 |
如果此時SDS-PAGE膠上也沒有指示劑，則表明轉膜時間過長，蛋白穿膜（此時就沒有再繼續做下去的必要了） |
注意控制轉膜時間；
電泳液反復使用也可能導致轉膜失敗 |
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抗體孵育不均勻 |
孵育時振蕩搖床轉速過快，或是混勻直徑不夠，導致孵育不充分或不均勻 |
確保搖床可以在50 rpm穩定運行；
選擇振蕩直徑在5~10 mm范圍內的搖床
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德國IKA為您提供“姐妹花”版本的蛋白質免疫印跡套裝，為廣大生命科學工作者提供最適合您操作習慣的產品組合：
表2：德國IKA蛋白質免疫印跡套裝（產品詳情請見www.ika.cn）
表2中的產品簡介如下，德國品質，始終如一，值得您信賴——
* T10 標準型套裝：高速均質機，用于分散組織于緩沖液，可選配一次性分散頭，避免反復清潔導致的交叉污染
* DBH 1：金屬浴，用于迅速升溫的加熱反應，標配PT 1000.60溫度傳感器，可準確測量溫度并在大數顯屏上顯示，方便同時觀察設定溫度和實際溫度，帶有計時功能
* ICC basic eco 18：恒溫水浴，二元一體泵可確保極佳的升溫速率和溫度均一性，透明浴槽方便觀察，智能的高、低液位報警方便日常操作
* KS 260基本型：振蕩搖床，混勻直徑10 mm，實際工作轉速范圍50 – 500 rpm，在低轉速下可長時間穩定運行，完全滿足生命科學實驗室的多種振蕩需求，可靈活選配多種夾具
如有任何疑問，歡迎您隨時聯系德國IKA應用中心：+86 (20)8222 6771 或applicationsupport@ika.cn
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