細(xì)胞培養(yǎng)是每個實驗人員都會使用的技術(shù)，其準(zhǔn)確性和可重復(fù)性對于實驗結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。然而，支原體污染作為一種常見且隱蔽的威脅，對細(xì)胞培養(yǎng)的影響不容忽視。

支原體是什么？

支原體是目前已知一類能在無生命培養(yǎng)基上生長繁殖的最小的原核細(xì)胞微生物，無細(xì)胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器。大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢，細(xì)胞培養(yǎng)過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。

采用常規(guī)的顯微鏡無法直接觀察到支原體，當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，而細(xì)胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。因此細(xì)胞都需要定期（如每個月）進行支原體污染的檢測。

支原體對細(xì)胞培養(yǎng)的危害：

1. 細(xì)胞生長抑制
支原體通過與細(xì)胞競爭營養(yǎng)資源、產(chǎn)生毒素或干擾細(xì)胞信號傳導(dǎo)，顯著抑制細(xì)胞的生長速率和增殖能力。這導(dǎo)致實驗所需細(xì)胞數(shù)量不足或細(xì)胞狀態(tài)不佳，影響實驗的進行和結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2. 基因表達(dá)異常
支原體感染能誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，影響DNA修復(fù)機制，導(dǎo)致基因表達(dá)模式發(fā)生變化。這種基因表達(dá)的異常會干擾對特定基因功能的研究，使得研究結(jié)果失真。

3. 蛋白質(zhì)合成干擾
支原體污染可能改變細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成與降解平衡，影響蛋白質(zhì)的功能和細(xì)胞間的相互作用，進而影響實驗結(jié)果的可靠性。

4. 細(xì)胞凋亡增加
支原體感染可觸發(fā)細(xì)胞凋亡程序，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這不僅減少了可用于實驗的活細(xì)胞數(shù)量，還可能混淆對細(xì)胞存活和凋亡機制的理解。

5. 實驗結(jié)果的不可重復(fù)性
支原體污染導(dǎo)致的細(xì)胞生理狀態(tài)變化，使得實驗結(jié)果難以在不同實驗室或不同時間點重復(fù)，嚴(yán)重阻礙了科學(xué)研究的進展。

在實驗室的日常研究，為了確保科研工作順利進行，定期檢測細(xì)胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染是很重要的。

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