（德國IBL：RE59221）

此試劑盒可用于人血漿和尿液中組胺的體外定量檢測。深化此實驗可用于細胞培養上清液的研究。

組胺（β-咪唑乙胺）是人體中最重要的介質，它主要存在于過敏反應的起始階段（速發型過敏）。組胺是由組胺酸經脫氨基作用產生的。組胺幾乎存在于機體的所有組織中，主要儲存于柱狀細胞和嗜堿性粒細胞的異染性顆粒中。組胺通常都是以無活性的復合體性存在，只有當需要的時候才會釋放。像其它的介質一樣，組胺不僅能調節過敏反應的各種臨床癥狀，也可以調節終止過敏反應的一系列效應。組胺在組織中的生物活性是通過三種受體來完成的，它們分別是H1，H2和H3受體。臨床檢測組胺的方法有：定量檢測各種速發型過敏反應中嗜堿性白細胞釋放組胺的量，也可以檢測過敏藥物治療后各種體液（血漿，尿液，細胞培養上清）中組胺的量。

   此ELISA試劑盒利用的是競爭法的原理。樣品中未知量的抗原和一定量的酶標抗原競爭性結合到包被在微孔中的抗體結合位點上。溫育后洗板以終止競爭反應。加入底物液后，溶液所顯示的顏色強度與樣品中抗原的量成反比。樣品的實驗結果可以從標準曲線上直接獲取。

試劑盒必須在2-8℃的環境下運輸和儲存，避免太陽直射。樣品的儲存與穩定性及試劑準備將在相關章節中闡述。如果將包被板密封并儲存于2-8℃的環境下時，試劑在有效期內穩定。

按照靜脈穿刺的常規注意事項采集樣品，血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品。混濁的樣品應當在實驗開始前離心以除去所有的顆粒性物質。
儲存	2-8℃	≤-20℃	≤-70℃	避免太陽直射，避免反復凍融。
穩定性	5小時	3個月	2年

實驗必須使用自然產生的尿液，也可使用24小時內產生的尿液。收集病人24小時內產生的尿液，并混合于含10-15ml 6N HCl防腐劑的容器中。為了計算結果，請確定尿液的總體積。實驗開始前請先將樣品離心。
	自然的尿液	酸化尿液		避免太陽直射，避免反復凍融。
儲存	2-8℃	2-8℃	≤-20℃
穩定性	8小時	3天	6個月

使用細胞培養上清作樣品，一般沒特殊注意事項 細胞培養基內的組胺濃度可能稍微要高些。

全血中組胺釋放量的檢測必須用肝素化全血，具體信息請見相應的說明書（RE95000）

注意：試劑盒有足夠做96份單孔檢測或48份雙孔檢測所需的試劑成分

數量	標記	成分
1×12×8	MTP	包被板，可拆，微孔中包被了羊抗兔抗血清。
1×5ml	ANTISERUM	組胺抗血清，藍色，即用，內含：兔抗血清、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞
1×75ul	ENZCONJ CONC	酶聯物，200倍濃縮，內含辣根過氧酶標記的組胺。
7×0.4ml	CAL P A-G  LYO	血漿標準品A-G，凍干，用于血漿樣品的定標。內含：組胺、人血漿。具體濃度請見試劑瓶標簽或質控單。
2×0.4ml	CONTROL P1+2 LYO	血漿質控1+2，凍干，內含：組胺、人血清。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標簽。
1×2.0ml 5×0.25ml	CAL U/C A-F	尿液/細胞培養標準品A-F，0;2.7;8.1;24.3;73;219ng/ml,即用，用于尿液和細胞培養樣品的定標。內含：組胺和0.1M的HCl。
2×0.25ml	CONTROL U/C 1+2	尿液質控1+2，即用，內含：組胺、人尿液（酸化的）。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標簽。
1×2.25ml	ACYLREAG	酰化試劑，即用，內含：DMF
1×60ml	ASSAYBUF CONC	檢測緩沖液，5倍濃縮，內含Tris緩沖液、吐溫、BSA和0.05%的硫柳汞。
1×50ml	WASHBUF CONC	洗滌液，20倍濃縮，內含磷酸緩沖液、吐溫和0.1%的硫柳汞。
1×10ml	INDICATORBUF	指示緩沖液，紫色，即用，內含：Tris緩沖液、苯酚（pH＜7.5時顏色會發生改變＝和0.1%的硫柳汞。
1×12ml	TMB SUBS	TMB底物液，即用，內含TMB、緩沖液和穩定劑。
1×12ml	TMB STOP	TMB終止液，即用，1M的H2SO4。
3×	FOIL	粘性金屬板

1）移液器，體積：10;20;50;100;1000ul

2）試管（12×75mm）

3）試管架

4）振蕩器

5）旋渦混合器（500rpm）

6）帶儲器的8道移液器

7）洗滌瓶，自動或半自動洗板機

8）酶標儀（參考波長：600-650nm）

9）蒸餾水或去離子水

10）            吸水紙、取樣吸頭和計時器

8.1凍干或濃縮成分的準備

(*)在稀釋前,確保塞子內無殘留液體.

8.2樣品的稀釋

樣品中組胺濃度高于最高標準品的樣品,應當在酰化前用相應的稀釋液稀釋,尿液樣品用0.1M的HCl,血漿樣品用樣品稀釋液（Cat.no. KEHP711）,試劑盒內未提供。

8.3樣品的�；�

用試管準備樣品

注意	不能血漿標準曲線確定酰化尿液或細胞培養樣品中組胺的濃度,也不能用U/C標準曲線確定�；�血漿樣品中組胺的濃度.

8.3.1血漿

1	將血漿標準品、血漿質控品和病人樣品分別100ul加入到相應的試管中。
2	在每一試管中加入100ul指示緩沖液，旋渦混合。
3	在每一試管中加入20ul�；�試劑，加入酰化試劑后立即旋渦混合。
4	將試管蓋好，室溫（18-25℃）溫育30分鐘。
5	在每一試管中加入750ul已稀釋好的檢測緩沖液，旋渦混合。

8.3.2尿液，細胞培養上清

注意：�；�處理好的樣品可在2-8℃下存放一晚，-20℃環境下可存放2天。

實驗結果不能當作任何治療結果的唯一原因，疾病的判斷還應當與其它臨床觀察和診斷檢測相結合。以下結果為正常人群的正常值（5%-95%），建議每個實驗室讀確定自己的正常值范圍：

血漿	尿液
	24小時尿液	自然產生的尿液
ng/ml	ug/d	ug/g肌酐酸
0.2-1.0	5-56	8-53

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。

 

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