對(duì)于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)科研來(lái)說(shuō),抗酪氨酸磷酸化抗體的出現(xiàn)是一個(gè)意義重大的事件。在沒有抗酪氨酸磷酸化抗體之前,蛋白質(zhì)和酶的酪氨酸磷酸化只能通過(guò)非常危險(xiǎn)的并且很費(fèi)時(shí)的放射性實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。而利用抗酪氨酸磷酸化抗體,則可以通過(guò)Western Blot或其它免疫學(xué)方法輕松地檢測(cè)到磷酸化信號(hào)。常規(guī)的檢測(cè)方法包括:用抗酪氨酸磷酸化抗體在Western Blot上檢測(cè)內(nèi)源或外源表達(dá)的磷酸化蛋白。如果目標(biāo)蛋白的含量較低,也可利用免疫沉淀的方法先富集發(fā)生磷酸化的酪氨酸蛋白,再檢測(cè)目標(biāo)蛋白的水平。抗酪氨酸磷酸化抗體也常用于檢測(cè)在不同處理的條件下,細(xì)胞內(nèi)總的酪氨酸磷酸化水平的變化情況,作為許多細(xì)胞生物現(xiàn)象的一個(gè)重要指標(biāo)。
我們都知道如果需要檢測(cè)某一個(gè)目標(biāo)蛋白的某一特定位點(diǎn)的磷酸化狀態(tài),可以選用該蛋白特定位點(diǎn)的磷酸化特異性抗體。但由于我們研究的通常是新的磷酸化位點(diǎn),或者這些蛋白特定位點(diǎn)的磷酸化抗體效果不夠好,我們不得不自己制備磷酸化抗體。如果大家自己制備過(guò)磷酸化抗體,就會(huì)知道磷酸化抗體的制備比一般抗體的制備更加困難,而且浪費(fèi)大量寶貴時(shí)間。現(xiàn)在國(guó)外的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)可以使用通用型的磷酸化抗體,只要巧妙的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),也可以達(dá)到同樣的檢測(cè)目的。以Yuan的文章為例,他們需要檢測(cè)BCR-ABL的磷酸化,但他們沒有特異性的磷酸化抗體。他們首先使用了抗c-ABL的抗體和蛋白G-瓊脂糖珠子來(lái)免疫沉淀富集BCR-ABL蛋白,然后再通過(guò)Western-Blot和4G10通用型酪氨酸磷酸化抗體(pan-phosphotyrosine)來(lái)鑒定BCR-ABL蛋白的酪氨酸磷酸化水平。另外一組以Clemens為首的科學(xué)家,則利用抗Dock蛋白抗體先免疫共沉淀了DACK蛋白,再用4G10酪氨酸磷酸化抗體來(lái)檢測(cè)DACK蛋白和DSH3PX1蛋白的酪氨酸磷酸化水平,通過(guò)區(qū)分這些蛋白的分子量大小,來(lái)確認(rèn)相應(yīng)的磷酸化條帶的蛋白身份。