聯科生物凋亡試劑盒AP101檢測步驟
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聯科生物凋亡檢測試劑盒（Annexin V/PI apoptosis kit，Cat#：AP101）是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。可以使用流式細胞儀，熒光顯微鏡或其他熒光檢測設備進行檢測。 本試劑盒還提供了碘化丙啶（PI）染色液，PI可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經喪失，Annexin V-FITC可以進入到細胞漿內，與位于細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸結合，從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同時期的細胞區分開來。 試劑盒組分
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樣品處理 |
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(1)、用合適的方法誘導細胞凋亡； (2)、懸浮細胞離心（1500rpm 離心 5min）收集；貼壁細胞用不含EDTA的胰酶消化并用含血清培養基洗一次（注：胰酶消化時間不易過長，否則容易引起假陽性）；或直接用Accutase酶消化（無需終止）；1500rpm 離心 5min收集細胞； (3)、用PBS洗滌細胞兩次（1500rpm離心5min）收集1-5 X105細胞，棄上清； (4)、制備1X Binding Buffer緩沖液：按10次分析的量計算，加1ml 5X Binding Buffer緩沖液到4ml的去離子水； (5)、用500ul 1X Binding Buffer重懸細胞(第4步稀釋的緩沖液） (6)、加入5ul annexin-V FITC和10ul PI (7)、避光室溫孵育5分鐘 (8)、上機檢測 | ||||||||||||||||||||
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流式檢測 |
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流式分析Annexin-V FITC（放射波長=488nm；吸收波長=530nm）用FITC信號檢測（通常是FL1通道）；PI染液用PE信號檢測（通常是FL2通道） | ||||||||||||||||||||
閱讀原文：http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014120007.html
