1.前言

人用藥品注冊技術要求國際協調會議( InternationalConference of Harmonizition ICH)對藥品殘留溶劑有明確的定義以及相關的指導原則。 ICH 將藥品生產及純化過程中常用的69 種有機溶劑按照對人體和環境的危害程度分為4類。第I類溶劑是指已知可以致癌并被強烈懷疑對人和環境有害的溶劑, 其殘留量必須控制在規定的范圍內；第II類溶劑是指無基因毒性但有動物致癌性的溶劑；第3類溶劑是指對人體低毒的溶劑；第4類是尚無足夠毒理學資料的溶劑（1-3）。阿米舒必利在提取過程中使用了有機溶劑甲醇和丙酮，按照上述指導原則，甲醇為第二類溶劑，其含量不能超過0.3%；丙酮為第三類溶劑，其含量不能超過0.5%。

本文介紹了用賽默飛世爾氣相色譜儀 (帶FID檢測器)和Triplus頂空自動進樣器分析阿米舒必利中這兩種有機溶劑殘留的分析方法，方法學的驗證表明，該方法準確有效。

2.實驗方法

2.1 儀器和試劑

Trace GC氣相色譜儀（賽默飛世爾科技 Thermo Fisher Scientific公司），帶FID檢測器；色譜柱為TR-V1 (30m x.25 mm x 3μm)； Triplus HS自動進樣器（賽默飛世爾科技Thermo Fisher Scientifc公司）甲醇和丙酮 (色譜純)購置于sigma公司； N， N-二甲基甲酰胺 (DMF，分析純)。

2.2 色譜條件

程序升溫：初始溫度:40 ℃(60 min), 升溫速率:30 ℃/min至200 ℃（3min）
載氣：恒流模式，流速為3ml/min
進樣口： 150℃，分流進樣，分流比為10： 1
檢測器溫度： 250℃
頂空參數設置：
孵化器溫度： 75℃
孵化時間： 30min
進樣量： 1ml

3.結果與討論

3.1系統適應性

因待測藥品的殘留溶劑主要是甲醇和丙酮，因此選擇上述2種有機溶劑，溶解在DMF中考察系統適用性，典型色譜圖見圖1。結果顯示，在上述色譜條件下，各溶劑分離完全。

圖1

3.2 頂空參數優化

3.2.1 孵化器溫度

分別取5mg甲醇和丙酮，溶于一定量的DMF中，使溶液的最終體積為5ml。平行制備4份相同濃度的待測樣品，將孵化器的溫度分別設置為65℃， 75℃，85℃和95℃，以此判斷不同孵化時間對檢測結果的影響。結果（如圖2）表明，隨著孵化溫度的升高，丙酮的峰面積也在增加，但是甲醇的響應卻是在75℃時為最高，這與國家藥典中推薦的孵化溫度相一致（75℃~85℃）。并且，由于阿米舒必利的化學名為4-氨基-N-[(1-乙基-2-吡咯)甲基]-5-已砜基-2-甲氧基苯甲酰胺，黃仕璋等(4) 通過研究表明，含甲氧基的樣品在較高頂空溫度下降解產生甲醇，而裂解速率主要受溫度影響，隨著樣品孵化溫度的增高，甲醇的含量也會顯著的增高，因而影響了真實的檢測結果。因此在檢測時，我們將孵化器的溫度設為75℃。

3.2.2 孵化時間

分別取5mg甲醇和丙酮，溶于一定量的DMF中，使溶液的最終體積為5ml。平行制備4份相同濃度的待測樣品，將孵化器的溫度分別設置為10min， 20min， 30min和40min，以此判斷不同孵化時間對檢測結果的影響。結果（如圖3）表明，隨著孵化時間的升高，丙酮和甲醇的峰面積均變化不大，考慮到樣品中的有機溶劑可能需要較長的時間才有利于其揮發，因此我們將孵化時間設為20min。

3.3標準曲線、檢出限和精密度

本方法采用外標法定量，由于做頂空進樣，考慮到不同樣品體積對氣體的膨脹有影響，所以這里以目標組分的峰面積Y對相應組分的絕對重量做標準曲線（5mg、 1mg、 500ug、 100ug和50ug），圖4A和B顯示，在這個儀器方法上甲醇和丙酮都有非常好的線性關系。以500ug為例，按信噪比為3計算得到甲醇的檢出限為1.5ug, 丙酮的檢出限1ug。配置甲醇和丙酮均為500ug平行的標樣5個，計算方法的重現性，得到甲醇的RSD值為3.76%，丙酮的RSD值為1.39。

3.4 樣品檢測

精密稱取1g樣品，用10ml容量瓶定容，取5ml放入頂空瓶中，按照上述方法進行樣品檢測，每個樣品平行進四次（譜圖如圖5所示），結果如下表所示。按照ICH的標準，甲醇的為第二類溶劑，含量不能超過0.3%，丙酮屬于第三類溶劑，含量不能超過0.5%，待測樣品中的溶劑殘留經檢測分別為甲醇0.004%和丙酮0.05%，符合ICH的標準。

3.5 回收率實驗

精密稱取上述樣品粉末0.5g，準確加入500ug甲醇和丙酮，最后用DMF定容到5ml，之后進行樣品檢測，每個樣品測定三次 (樣品加標如圖6所示)，最終測得甲醇和丙酮的平均回收率分別為98.4%和101.7%。

3.6 注意事項

所有樣品溶解以及標樣配置的過程需在冰上進行操作，防止有機溶劑揮發所引起的結果誤差。

參考文獻：

1. 周海鈞主譯1 藥品注冊的國際技術要求?質量部分[M] 北京：人民衛生出版社, 2000： 82
2. 中國藥典[ S] . 二部, 2000：附錄54
3. Residual Solvent Testing: A Review of Gas-Chromatographic and Alternative Techniques. Pharmaceutical Research, 2003,20(3): 337-344
4. 頭孢西丁鈉中甲醇殘留量的頂空毛細管GC法測定.中國醫藥工業雜志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2007, 38(10): 727-728