酵母β-葡聚糖含量化學比色法定量檢測試劑盒產品使用說明書

主要用途

YIJI 酵母β-葡聚糖含量化學比色法定量檢測試劑是一種旨在通過染料剛果紅與β-D-葡聚糖結合沉淀，產生吸光峰值的變化，來測定樣品中β-葡聚糖濃度的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種培養酵母菌種β-葡聚糖的含量檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

β-D-葡聚糖（β-D-glucan）是一種葡萄糖單體通過β-1,3或β-1,4主鏈和β-1,6側鏈上的糖苷鍵（glycosidic bond）鏈接而成的多聚體葡萄糖分子，普遍存在于植物中纖維素（cellulose）、谷粒外皮、以及藻類、真菌、酵母、蘑菇或細菌的胞壁等。其中β-1,3-D葡聚糖更為常見，具有生物活性和藥物特性，包括免疫刺激、抗炎、抗菌、抗傳染、抗癌、降低膽固醇、放射線的保護及傷口愈合等活性。β-D-葡聚糖的測定包括苯酚-硫酸法、剛果紅法、苯胺藍法和酶連續反應法等，其中剛果紅法作為比色定量技術，操作非常方便。基于β-D-葡聚糖，與剛果紅（Congo red；benzidinediazo-bis-1-naphthylamine-4-sulfonic acid）反應產生沉淀復合物，呈現吸光峰值的降低（波長540nm），由此定量測定β- D-葡聚糖的含量。

產品內容

YIJI 萃取液（Reagent A）   毫升

YIJI 稀釋液（Reagent B）      毫升

YIJI 反應液（Reagent C） 毫升

YIJI 標準液（Reagent D） 毫升

產品說明書 1份

保存方式

保存 YIJI 標準液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4冰箱里；YIJI反應液（Reagent C）避免光照；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于標準液配制或反應的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

電爐：用于煮沸孵育

比色皿或酶標板：用于染色后比色檢測的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

實驗步驟

 樣品準備

• 準備好5毫升待測的新鮮酵母細胞（OD600＝1.0，即1 X 10⁸細胞/毫升）
• 移入到15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 渦旋震蕩15秒
• 煮沸水浴里孵育5分鐘
• 渦旋震蕩15秒
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI  稀釋液（Reagent B），混勻
• 置于冰槽里備用

• 測定準備

• 準備好待測樣品，置于冰槽里
• 設定好分光光度儀或酶標儀（溫度為25℃）：波長540nm，并置零 
• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 按照下表配制標準液
• 將1至5號管置于室溫下備用；標準管濃度見下表

• 標準曲線測定

• 加入500微升上述配制的標準液到1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 反應液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取上清液到比色皿或酶標板
• 即刻放進分光光度儀檢測：獲得相對吸光讀數
• 重復實驗步驟1至6四次
• 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為相對吸光單位；橫座標（X軸）為標準葡聚糖含量（微克）

• 樣品測定

• 加入500微升上述制備的待測樣品到1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 反應液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取上清液到比色皿或酶標板
• 即刻放進分光光度儀檢測：獲得相對吸光讀數
• 根據標準曲線獲得樣品對應葡聚糖含量

• 計算樣品濃度

注意事項

• 本產品為25次操作，包括標準樣
• 本產品檢測范圍是100至300微克葡聚糖
• 操作時，須戴手套
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
• 本公司提供系列葡聚糖檢測相關試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感