KinExA分子與完整細胞相互作用系統(tǒng)在CAR-T細胞治療中的應用
因多種因素的限制，自體CAR-T細胞治療產(chǎn)品可能在應用于患者前未必能夠進行全部項目的檢定，所以工藝驗證非常重要。工藝研究及驗證必須結合工藝的實際情況設定相應的驗證參數(shù)，CAR-T細胞產(chǎn)品工藝研究在不斷發(fā)展，到目前為止，業(yè)界對何種工藝最好并未達成共識。因此，可以在產(chǎn)品研發(fā)過程及早期臨床試驗階段開展不同程度的工藝驗證研究，工藝驗證完成后，應在關鍵工藝步驟設置關鍵過程控制參數(shù)及標準，以提高CAR-T細胞產(chǎn)品的生產(chǎn)一致性。
CAR-T細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究及檢測項目一般應包括：細胞數(shù)量及其存活率、細胞表型、CAR陽性率檢測、生物學效力檢測，無菌檢測、支原體、熱原/內(nèi)毒素的檢測、CAR-T細胞中病毒載體拷貝數(shù)及整合的檢測等。如果能夠檢測CAR-T細胞與抗原分子的親和力，以及CAR-T細胞上抗體的表達量，無疑會提升CAR-T細胞的質(zhì)量控制標準。
目前市面上除了KinExA技術外，沒有其他特別有效的方式檢測完整細胞與分子間的親和力，更無從判斷細胞上分子的表達量。KinExA技術可以檢測細胞與分子間的親和力，并且可以計算細胞上分子的表達量。其檢測原理如下圖，先將梯度稀釋的細胞與恒定濃度的分子共同孵育達到平衡，離心之后收集上清液（此時上清液中只存在游離的分子），再通過已提前包被過的珠子捕獲游離的分子，用熒光標簽的抗體檢測游離分子的量，通過檢測器檢測得到相應的數(shù)值后，利用KinExA系統(tǒng)軟件進行數(shù)據(jù)分析。
下圖是國內(nèi)某知名CAR-T公司通過KinExA技術檢測CAR-T細胞與抗原分子間相互作用的結果。
結果表明，CAR-T細胞與抗原的親和力Kd為45.41pM，T細胞表面CAR的表達水平為1.368e+5，Kd與EL的95%置信區(qū)間均較窄，數(shù)據(jù)非常準確可信
CAR-T細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究及檢測項目一般應包括：細胞數(shù)量及其存活率、細胞表型、CAR陽性率檢測、生物學效力檢測，無菌檢測、支原體、熱原/內(nèi)毒素的檢測、CAR-T細胞中病毒載體拷貝數(shù)及整合的檢測等。如果能夠檢測CAR-T細胞與抗原分子的親和力，以及CAR-T細胞上抗體的表達量，無疑會提升CAR-T細胞的質(zhì)量控制標準。
目前市面上除了KinExA技術外，沒有其他特別有效的方式檢測完整細胞與分子間的親和力，更無從判斷細胞上分子的表達量。KinExA技術可以檢測細胞與分子間的親和力，并且可以計算細胞上分子的表達量。其檢測原理如下圖，先將梯度稀釋的細胞與恒定濃度的分子共同孵育達到平衡，離心之后收集上清液（此時上清液中只存在游離的分子），再通過已提前包被過的珠子捕獲游離的分子，用熒光標簽的抗體檢測游離分子的量，通過檢測器檢測得到相應的數(shù)值后，利用KinExA系統(tǒng)軟件進行數(shù)據(jù)分析。
下圖是國內(nèi)某知名CAR-T公司通過KinExA技術檢測CAR-T細胞與抗原分子間相互作用的結果。
結果表明，CAR-T細胞與抗原的親和力Kd為45.41pM，T細胞表面CAR的表達水平為1.368e+5，Kd與EL的95%置信區(qū)間均較窄，數(shù)據(jù)非常準確可信
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