甲磺酸乙酯（EMS）細胞突變誘導試劑盒產(chǎn)品說明書
甲磺酸乙酯（EMS）細胞突變誘導試劑是一種旨在使用烷化劑甲磺酸乙酯誘導細胞發(fā)生變異而產(chǎn)生HPRT或TK基因功能缺失的突變株，成為篩選應用標記細胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物細胞和人體細胞。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，突變頻率高。
 
技術(shù)背景
 
甲磺酸乙酯（ethyl methanesulfonate，EMS）是一種化學誘變致畸的烷化劑（alkylating agent）。它將導致細胞次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase；HPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（thymidine kinase，TK）基因座發(fā)生位點突變，而引起基因功能缺失。由此采用6-硫氫基鳥糞嘌呤（6-thioguanine；6-TG）和5-溴脫氧尿嘧啶（5-Bromodeoxyuridine；BudR）分別篩選TK和HPRT缺失型細胞，因為6-TG是的結(jié)構(gòu)替代物，而BUdR是THYMIDINE的結(jié)構(gòu)類似物，當TK和HPRT正常的情況下，它們將利用6-TG和BUdR進行DNA復制而使細胞死亡，反之，它們無法利用，細胞則繼續(xù)生存。這是負向選擇。但是正常的細胞（例如正常人體細胞，其X染色體的長臂上帶有此基因）能在氨基嘌呤胸苷（hypoxanthine/aminopterin/thymidine；HAT）培養(yǎng)基中生長，這是正向選擇。