抗體或蛋白標記是指將標記物（酶，熒光素，生物素等）共價連接到抗體或其他蛋白上，與待檢測物（如某些特定抗原）特異性反應形成多元復合物，并借助于熒光顯微鏡、射線測量儀、酶標檢測儀、電子顯微鏡和發光免疫測定儀等精密儀器對試驗結果直接鏡檢觀察或進行自動化測定，可以在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上對抗原、抗體反應進行定性和定位研究或應用各種液相和固相免疫分析方法對體液中的半抗原、抗原進行定性和定量測定。目前抗體標記技術己被廣泛用于醫學病理學、免疫組織化學、分子生物學、生物制藥等領域的分析研究與技術測定，常見的抗體標記技術包括酶標記法，生物素化標記法，熒光素標記法等。

常用的抗體/蛋白標記技術：

1. 酶標記

通過共價鍵經適當方法將酶聯結在抗體或蛋白上，制成酶標抗體，再借酶對底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，這些有色產物可用肉眼、光學顯微鏡和電子顯微鏡觀查，也可以用分光光度計測定，呈色反應顯示了酶的存在，從而證明發生了相應的免疫反應。

蛋白質 - 蛋白質綴合通常用雙功能接頭交聯劑（例如常用的SMCC）進行，交聯劑的一端（通過NHS酯）與氨基酸賴氨酸和N-末端中發現的胺（-NH2）反應，另一端（通過馬來酰亞胺）與氨基酸中發現的硫醇基團（-SH）反應。然而，SMCC修飾的蛋白質極不穩定并且通常是自身反應性的。

美國AAT Bioquest開發的Buccutite 過氧化物酶（HRP）抗體偶聯試劑盒可用于直接從蛋白質，肽和含有游離氨基的其他配體制備辣根過氧化物酶（HRP）偶聯物。試劑盒中提供的HRP已使用我們專有的接頭Buccutite FOL預先激活，可直接用于綴合。 Buccutite FOL活化的HRP在極其溫和的中性條件下容易與含有Buccutite MTA的分子反應，無需任何催化劑

優勢：與常用的SMCC和其他類似技術相比，我們的Buccutite 生物共軛系統更易于使用，它能夠以更高的效率和產量實現生物分子的更快和定量綴合。 

辣根過氧化物酶(HRP)抗體偶聯試劑盒（AAT-5504）工作示意圖

 2.生物素標記 

親和素與生物素都可與蛋白質(包括抗原、抗體、酶等)、熒光素等分子結合而不影響后者的生物活性，是理想的標記劑。一個抗體分子可偶聯數十個生物素或親和素分子，而親和素或生物素分子又可與酶或熒光素結合，從而組成一個生物放大系統，顯著提高檢測的靈敏度。常用的有親和素--生物素標記法(Labeled avidin biotin，LAB)、親和素-生物素橋法(bridged avidin biotin, BAB)和親和素-生物素-過氧化物酶復合物法(avidin biotin peroxid asecomplex，ABC)。

美國AAT Bioquest生產的ReadiLink 蛋白質生物素偶聯試劑盒（AAT-5520）可將各種生物分子標記上生物素。試劑盒使用可與IgG和其他生物分子的氨基反應的生物素琥珀酰亞胺酯進行直接標記，根據IgG分子上可用的分子量和賴氨酸殘基，可以將每個IgG分子與3-6個生物素分子綴合。

優勢：簡便快捷，一小時內完成。

生物素琥珀酰亞胺酯化學結構

 3.熒光標記

染料與蛋白質的結合要求在染料和蛋白質之間形成穩定的共價鍵，且在大多數條件下這種共價鍵不可被破壞。與蛋白質的固有熒光相比，小型有機染料在選擇標記位點時具有更大的靈活性以及熒光的增強性，已廣泛用于蛋白質標記中。在用適當的染料標記后，可以在各種生物過程中對蛋白質進行可視化，從而使它們可以生化檢測中被定量或在細胞研究中定位。染料-蛋白質綴合物已成為研究酶活性，蛋白質相互作用，構象變化以及調節和觀察特定生物學過程的非常重要的工具，已在ELISA，蛋白質印跡，流式細胞檢測和細胞成像中得到廣泛應用。

美國AAT Bioquest的ReadiLink™快速抗體標記試劑盒提供了一種便捷的方法，可以從如iFluor™染料和mFluor™染料以及其他小型有機染料等20多種熒光標記來標記抗體，標記好的抗體完美兼容熒光成像或流式細胞儀等下游檢測。還提供ReadiLink™快速抗體標記試劑盒，能夠將生物素和半抗原載體BSA和KLH偶聯到生物分子上，應用于免疫和抗體生產。

ReadiLink™快速抗體標記試劑盒的優勢：

全面 -包括標記100 µg抗體所需的所有試劑

方便 -簡單的兩步標記方案，不需要過柱純化

多功能 -能分別標記的一抗、二抗以及蛋白質（> 10 kDa），標記的量大概為50-100 µg

穩定 -產生穩定結合熒光標記的抗體偶聯物，用于下游基于熒光的成像或流式細胞儀應用

ReadiLink™快速抗體標記試劑盒選擇指南：

ReadiLink™快速抗體標記試劑盒是如何工作的？

ReadiLink™快速抗體標記試劑盒利用與胺反應性部分（琥珀酰亞胺酯）偶聯的熒光團，這些活性染料選擇性結合形成羧酰胺鍵的蛋白質的脂族胺。這些羧酰胺鍵一旦形成，將非常穩定，確保標記物和蛋白質之間不會解離。偶聯并添加TQ™染色的淬滅緩沖液后，任何游離的未結合ReadiLink™標記將與淬滅劑結合并變為非熒光性。添加TQ™染色的淬滅緩沖液是關鍵，因為它消除了背景干擾以及色譜柱純化步驟。

ReadiLink™抗體標記試劑盒包括進行兩個結合反應（2 x 50 µg）的所有基本成分。每個試劑盒均可用于標記單克隆/多克隆抗體或其他蛋白質（> 10 kD）。

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AAT Bioquest的產品幫助全世界的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

作為AAT Bioquest Inc.的中國區域代理，艾美捷科技為中國客戶提供光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術等全系列解決方案。我們也將一如既往更加努力為國內用戶提供快捷、方便的高質量產品，同時更為您售前售后全面技術支持。