除了化學發光檢測,還有更優秀的近紅外熒光檢測Western blot
瀏覽次數:3049 發布日期:2019-10-26
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在介紹近紅外熒光凝膠成像凝膠成像檢測方法之前,我們來回顧下化學發光的歷史:WB是目前蛋白檢測的主要方法之一,1981年由尼爾·伯奈特(Neal Burnette)所著的《分析生物化學》中首次被提出,一直延續至今,仍有很多忠實的粉絲。
化學發光檢測的優點:
靈敏度高,其靈敏度高達fg級別。
從零到一,化學發光的優點深入人心,經歷多年考驗仍占據一定地位。
化學發光檢測的缺點:
隨著科研水平的提高,簡單的化學發光已經不能滿足現在高水平的科研要求。例如:目的和內參要在同一張印跡膜上,信號和蛋白濃度要有很好的線性關系,使用總蛋白歸一化等方法,這樣傳統的化學發光就很難滿足要求。
化學發光的信號是動態的,信號會隨著時間而發生變化。
化學發光的信號不與目標蛋白的濃度呈線性比例關系。
由于期刊雜志要求的升級,
熒光凝膠成像WB隆重登上舞臺,特別是近紅外熒光凝膠成像檢測,成為
熒光凝膠成像WB精準定量的金標準:
近紅外WB的優點:
精準定量——
熒光凝膠成像標記的信號是靜態的,信號不會隨著時間而發生變化。信號與目標蛋白濃度呈線性比例關系。
信號持久——印跡膜晾干避光保存,信號可持續數月,化學發光僅幾小時
可進行多重檢測——無需剪膜、跑平行膠和剝離膜,對于共遷移條帶如磷酸化和非磷酸化檢測優勢更明顯
節約成本——二抗可重復使用,稀釋比例高,無需化學發光檢測的膠片,顯影液,定影液和顯色底物
要想完成近紅外
熒光凝膠成像多重檢測,需要帶有近紅外光源的多功能分子成像系統。
那市面上成像產品那么多,我們究竟該怎么進行選擇?
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