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如何在外泌體研究中正確使用血清

瀏覽次數:1624 發布日期:2019-12-9  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

目前,胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是細胞培養實驗中最常使用的試劑,為細胞生長提供豐富的營養物質。

但在外泌體研究中,如果仍然使用胎牛血清培養細胞、通過收集上清液來提取外泌體進行實驗,胎牛血清中大量的牛源外泌體將對實驗分析造成極大的干擾。

因此,使用FBS時,必須要做牛源外泌體的去除工作。

那么,如何去除胎牛血清中的外泌體呢?

01 超速離心法 
顧名思義,該法基于超高速離心機。有些廠家建議操作為120000g,18h,4℃;
02 超濾法 
芬蘭團隊(Roman Kornilov et al.)2018年在Journal of Extracellular Vesicles發表的文章介紹,以超濾的方式去除FBS中的外泌體:
Ultrafiltration EV-depleted FBS (UF-dFBS) was obtained by centrifuging regular FBS in Amicon ultra-15 centrifugal filters (ref: UFC910024, 100kDa Merk Millipore Ltd.,
Tullagreen, Carrigtwohill, Co. Cork, Ireland) for 55 min at 3,000 g. 
03 商品化去外泌體血清 
目前市面上已有若干品牌的EV-depleted Serum銷售,使用方法和常規胎牛血清一致,無需做額外處理。
當然,我們重點需要考慮幾種方法的外泌體去除效率。

上文中提到的芬蘭團隊將超速離心法、超濾法、S品牌的商品化EV-depleted FBS的外泌體去除效果做了比對。這里,我們看一下NTA(nanoparticles tracking analysis)的對比結果。

FBS:常規胎牛血清

UC-dFBS:超速離心處理的去外泌體血清(121896g,19h)

UF-dFBS:超濾處理的去外泌體血清

SBI-dFBS:S品牌的商品化去外泌體血清


 

該團隊先對三組樣本做外泌體提取,將提取物用PBS重懸后用NTA檢測,獲取的濃度數據可以看出:芬蘭團隊采用的超濾處理方式和S品牌的顆粒殘留量相近,均較低;而用超離處理方式的顆粒殘留量要高出1-2倍。從顆粒值推算外泌體去除率,超濾處理方式和S品牌達到96%,超離處理方式僅達88%。

所以,超速離心法的外泌體去除效果并不理想。部分其他文獻也有提及,如Tosar JP et al., J Extracell Vesicles, 2017;Wei Z et al., Sci Rep, 2016.


 

部分研究者會擔心胎牛血清經處理后是否會影響細胞的生長,該團隊也用幾組血清分別培養脂肪來源的MSC,結果發現并無明顯差異。

以上數據來自于:Efficient ultrafiltration based protocol to deplete extracellular vesicles from fetal bovine serum (DOI: 10.1080/20013078.2017.1422674)

超速離心法并不一定能達到很好的外泌體去除效果,
當然目前也沒有一種方式是可以完全去除胎牛血清中的牛源外泌體。
除非使用無血清培養體系。

逍鵬生物推出的VivaCell 去外泌體血清使用改良版的超濾法,胎牛血清中的外泌體去除率可達97%(甚至更高)。

另外,生產全過程符合GMP要求,可有效預防支原體污染、交叉污染等,且產品在百級環境下過濾除菌分裝,可保證產品的無菌效果(見某批次COA截圖)。


我們推薦您使用VivaCell去外泌體血清,其有效去除胎牛血清中的牛源外泌體,避免了自行處理的不確定性、污染風險以及處理后的驗證工作,為您節約時間成本。



發布者:上海逍鵬生物科技有限公司
聯系電話:021-58785545
E-mail:sales@xpbiomed.com

標簽: 外泌體 血清
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