2019年冠狀病毒病（COVID-19）的大流行繼續影響著世界大部分地區。對新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）診斷檢測的認識仍在不斷發展，對各類檢測性質的清楚認識和對其結果的解讀十分重要。
 

▲詳見https://jamanetwork.com/journals/jama/fullarticle/2765837

近日，《JAMA》發表了一篇觀點性文章，描述了如何解讀2種常用于SARS-CoV-2感染的診斷檢測——逆轉錄酶-聚合酶鏈反應（RT-PCR）和IgM和IgG酶聯免疫吸附試驗（ELISA），以及其檢測結果如何隨時間變化。

 

▲SARS-CoV-2診斷檢測與COVID-19發生發展的動態關系

注
估計的時間間隔和病毒檢測率是基于一些已發表報告的數據。由于研究值的差異性，圖中估計的時間間隔應被認為是近似值，僅定性地給出了SARS-CoV-2感染的可能檢測概率。
a 只有在患者從暴露時開始主動隨訪的情況下，才會開展檢測。
b 鼻咽拭子的PCR結果更可能為陰性，而不是陽性。

病毒RNA的RT-PCR檢測
迄今為止，診斷COVID-19最常用和最可靠的檢測方法是基于鼻咽拭子或其他上呼吸道樣本（包括咽拭子或最近采用的唾液）的RT-PCR檢測。不同的制造商使用不同的RNA基因靶點，大多數檢測針對病毒包膜（env）、核衣殼（N）、刺突糖蛋白（S）、RNA依賴性RNA聚合酶（RdRp）和ORF1基因中的一個或多個。根據一些比較性研究，除了RdRp-SARSr (Charité)引物探針可能由于反向引物的不匹配而具有稍低的敏感性外，RT-PCR檢測對不同單個基因的敏感性是相當的。

在大多數有癥狀的SARS-CoV-2感染者中，鼻咽拭子中的病毒RNA在癥狀出現的第1天就可以檢測到，并在癥狀出現的第1周內達到高峰。RT-PCR的循環閾值（Ct）指產生熒光信號所需的復制周期數，較低的Ct值代表較高的病毒RNA載量。臨床報告Ct值小于40為PCR陽性。RT-PCR檢測的陽性率在第3周開始下降，隨后變得不可檢測。

然而，重癥住院COVID-19患者的Ct值低于輕癥患者的Ct值，并且可能在發病3周后仍持續表現為PCR檢測陽性，而大多數輕癥患者則呈陰性結果。值得注意的是，PCR結果呈“陽性”僅反映檢測到病毒RNA，并不一定表示存在活病毒。
在某些情況下，即使在第一次檢測呈陽性的6周之后，仍可通過RT-PCR檢測到病毒RNA。少數病例在24小時連續兩次PCR檢測呈陰性后也轉為呈陽性。尚不清楚這是否是檢測錯誤、再次感染或再次激活。

▶ 在一項對9名COVID-19患者的研究中，在發病的第8天之后，研究人員未能從培養基中分離病毒，這與發病第1周之后病毒感染性的下降有關。

這就是為什么美國疾病控制和預防中心（CDC）就“醫護人員何時可以重回工作崗位”提出了“基于癥狀的策略”建議：
“在恢復后至少3天（72小時）達到未使用退燒藥的真正退燒；并且呼吸系統癥狀（如咳嗽、呼吸急促）得到改善；并且自首次癥狀出現至少已過去10天。”

其他樣本的PCR陽性時間線與鼻咽拭子不太相同。

▶ 在一項研究中，96名受感染者中有55名（57%）的糞便樣本檢測出PCR陽性，而在鼻咽拭子呈陰性后，在4-11天的中位數期間其糞便PCR仍保持陽性，但與臨床嚴重程度無關。

▶ 有研究發現，痰和糞便中PCR陽性持續時間相似。痰中PCR陽性率下降較慢，在鼻咽拭子陰性后仍可能為陽性。

▶ 另一項研究發現，在205例確診為COVID-19的患者中，RT-PCR陽性率最高的是支氣管肺泡灌洗標本（93%），其次是痰（72%）、鼻拭子（63%）、咽拭子（32%）。

假陰性結果主要是由于與發病有關的采樣時機不當和采樣技術不當，尤其是鼻咽拭子。大多數RT-PCR檢測的特異性為100%，這是因為引物設計對SARS-CoV-2的基因組序列具有特異性。由于技術錯誤和試劑污染，偶爾會出現假陽性結果。

SARS-CoV-2的抗體檢測
SARS-CoV-2感染也可以通過檢測宿主對SARS-CoV-2感染的免疫反應被間接檢測到。血清學診斷對于輕到中度COVID-19患者尤其重要，這些患者可能在發病兩周之后可被檢出。血清學診斷也正在成為了解社區中COVID-19傳播范圍和識別潛在“已獲得免疫通行證”個體的重要工具。

最敏感和最早的血清學標志物是總抗體，其水平從癥狀出現的第2周開始升高。雖然IgM和IgG-ELISA早在癥狀出現的第4天就被發現呈陽性，但在疾病的第2周和第3周才呈較高水平。

▶ 例如，根據兩項分別對23名COVID-19患者和85名患者的檢測，所有患者在臨床發病的第3周和第4周之間都發生了IgM和IgG血清轉化。此后，IgM開始下降，到第5周達到較低水平，到第7周幾乎消失；而IgG持續超過7周。

▶ 在一項140例患者的研究中，PCR和IgM-ELISA聯合檢測核衣殼（NC）抗原的敏感性達到98.6%，而單獨PCR檢測僅51.9%。在發病的最初5.5天，定量PCR的陽性率高于IgM，而IgM-ELISA在發病的第5.5天后的陽性率更高。

基于ELISA的IgM和IgG抗體檢測對COVID-19的診斷具有95%以上的特異性。首次PCR檢測和2周后進行配對血清樣本檢測，可進一步提高診斷準確率。

通常，大多數抗體都是針對SARS-CoV-2中最豐富的核衣殼蛋白（NC）。因此，針對NC抗體的檢測將是最敏感的。然而，S蛋白的受體結合域（RBD-S）是宿主附著蛋白，抗RBD-S的抗體將更具特異性，有望成為中和抗體。因此，用上述一種或兩種抗原檢測IgG和IgM具有較高的敏感性。不過，抗體可能與非典冠狀病毒（SARS-CoV）和其他冠狀病毒有交叉反應。

抗體的即時/床邊快速檢測已經得到廣泛的商業化開發，但質量參差不齊。許多制造商沒有透露所用抗原的性質。這些檢測本質上是純定性的，只能表明是否存在SARS-CoV-2抗體。

中和抗體的存在只能通過菌斑減少中和測試來證實。不過，ELISA檢測到的IgG抗體的高滴度被發現與中和抗體呈正相關。中和抗體的長期持久性和保護期尚不清楚。

展望
研究利用現有證據，設計了檢測COVID-19的診斷標記物的臨床時間線。大多數可獲得的數據是針對沒有免疫受損的成年人群的。PCR陽性和血清轉化的時間進程在兒童和其他人群中可能有所不同，包括大量無癥狀個體在沒有積極監測的情況下未被診斷。
許多疑問仍待解決，特別是在感染SARS-CoV-2的無癥狀和有癥狀的個體中，潛在免疫力能持續多久？

先達基因成功完成ERA法新型冠狀病毒快速檢測試劑盒開發
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樣品檢測結果：

 

圖1：先達基因GS8熒光檢測儀檢測結果

 

表1：先達基因GS8儀器檢測結果分析

 
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