6月4日晚上七點，賽業(yè)生物云課堂開始了主題為“神經(jīng)退行性疾病研究常用動物模型及其應用”的第四期課程，需要課件的老師可以關注“賽業(yè)生物訂閱號”，后臺留言“004”。針對答疑環(huán)節(jié)未及時解答的問題，我們進行了收集整理，下文為黃穎博士針對答疑環(huán)節(jié)提出的問題給出的詳細解答。

 

Q：有些文獻的老鼠品系為SAMP8，不知道老師了解這個品系的老鼠嗎？它和APP/PS1比起來怎樣差別？

A：這個是全面衰老的模型，在轉(zhuǎn)基因技術未出現(xiàn)之前，因為這個老鼠有一定的AD表型，主要是有老年斑，所以被當成AD模型。但現(xiàn)在我們可以通過轉(zhuǎn)基因技術獲得產(chǎn)生老年斑且和AD關系更緊密的小鼠，或者可以直接注射合成的Aβ，這種小鼠的優(yōu)勢就沒有了。而且這種小鼠的壽命太短，無法做后期研究。所以目前總體來說，用SAMP8小鼠研究AD，難以發(fā)高分文章。

 

Q：以AD為例，有些轉(zhuǎn)的人的APP，有轉(zhuǎn)的小鼠的，表型有區(qū)別嗎？以及轉(zhuǎn)基因小鼠，轉(zhuǎn)進去的拷貝數(shù)對表型有多大影響？

A：1. 表型是有區(qū)別的。小鼠和人的Aβ有3個AA的差異，人的更容易聚集；小鼠的APP在被BACE1剪切的時候效率更高。這就造成了用小鼠的APP更容易被BACE1剪，對造模有利，但是產(chǎn)生的Aβ聚集的能力較差；而用人的APP，如果拷貝數(shù)不夠，可能在利用BACE1這一點上競爭不過小鼠的APP，但目前的AD轉(zhuǎn)基因小鼠已經(jīng)通過拷貝數(shù)的增加解決了這個問題；另一方面現(xiàn)在的雙轉(zhuǎn)APP/PS1系列小鼠中人的PS1對hAPP剪切效率高，所以小鼠的APP就用的少了。

2. 至于拷貝數(shù)，對表型也有很大的影響，一方面轉(zhuǎn)基因這種隨機插入會有破壞原有基因的可能；另一方面拷貝數(shù)增加肯定會增加Aβ的含量，但也需要考慮插入基因在基因組中的位置，不同的位置表達活性會受到影響。

 

Q：黃博士您好，AD患者常常共患精神疾病，是否可以造出這種共患病模型呢？

A：AD小鼠在一定程度上會存在抑郁或者社交回避行為，但是嚴重程度不同。如果想要加重精神疾病的行為，一方面可以結(jié)合該精神疾病遺傳易感基因造模（基因編輯的方法，但精神疾病大多只是易感性），不過這種方法在時間、效果和花費上都有一定風險，所以，一般還是對AD小鼠進行電擊或者懸尾，限制活動等方式建模，要根據(jù)您研究的精神疾病種類采用具體的方法。

 

Q：黃博士您好，我想問下關于APP/PS1小鼠進行新物體識別試驗的關鍵點？

A：新物體識別實驗關鍵點：

1. 相對而言，NORT實驗中的小鼠內(nèi)在探索動機不如水迷宮或者其他饑餓驅(qū)動的強。此外，AD是老年病，太小還沒發(fā)病，看不出和對照的區(qū)別，因此在小鼠年齡稍大一點做更容易在NORT中出現(xiàn)記憶衰退表型（不要早于6個月，別人文獻里做出來了，我們不見得能重復出來）；

2. 每換下一只小鼠前一定要擦干凈物體，箱子也要擦干凈，建議同樣的物體多準備十幾套，這樣可以不用擦洗，每次直接用沒有上一只小鼠接觸的物體，不過這是理想情況，具體看你們實驗室會不會支持你這么干。

3. 要充分考慮實驗目的來確定學習和記憶之間的間隔時間，一般短時記憶10分鐘-1小時，長時記憶12小時-24小時。

4. 老鼠最好實驗前1周就放到實驗所在的房間飼養(yǎng)，總之有條件的話盡早適應環(huán)境。

5. 每次一定要記錄好小鼠的狀態(tài)，因為AD小鼠經(jīng)常有異常精神狀態(tài)的出現(xiàn)（特別是15個月之后），有異常的可以有理有據(jù)地剔除。

 

Q：有些文獻里面提出的C57-APP/PS1 里的老鼠表示啥意思啊？

A：C57是老鼠的品系，是一種近交系小鼠，APP和PS1是家族性AD中的突變基因，所以人們希望把突變了的這兩個基因在小鼠里過表達，以獲得AD的表型。

 

Q：我想問下關于AD模型，比如說其他藥物誘導的模型與轉(zhuǎn)基因鼠的優(yōu)缺點，比如說脂多糖和d-gal？

A：藥物誘導快速，年齡限制較小；但其實目前AD的誘導方法都沒有構(gòu)成與人AD發(fā)病的因果關系。雖然Aβ假說和tau假說一直受到挑戰(zhàn)和藥物開發(fā)的結(jié)果打臉，但這兩個基因的突變就是會產(chǎn)生人的AD，這個是確定的。不過基因編輯尤其是轉(zhuǎn)基因小鼠的問題也不少，過表達本身就是一種artificial，KI的表型又不明顯。但是總體而言，從科學的角度上看，在藥物誘導AD的機理不明確之前，基因編輯小鼠的模型更令人信服。

 

Q：黃博士您好，我們現(xiàn)在做一個實驗。如果我們選用的實驗鼠是APP/PS1，那么他選用的對照鼠最好是什么老鼠？

A：如果您不是專門研究APP或者是PS1的功能，只需要AD的病理特征的話，用同窩野生型就行了，目前轉(zhuǎn)基因小鼠只能這樣選對照。

 

Q：怎樣才算合格的模型，怎樣保證實驗的統(tǒng)一性呢？

A：以我最熟悉的AD小鼠為例，完全合格的模型需要：

1. 用人的PS1或者APP替代鼠源對應基因

2. 全長基因敲入（不是過表達哦）

3. 有一切病理表型

但其既然是模型，就每一點都要妥協(xié)。所以只能像盲人摸象一樣用有不同特性的模式動物去模擬，最后拼湊出一個較為完整的疾病機理出來。所以只要能有一部分病理表現(xiàn)是穩(wěn)定的模型就是合格的模型。而基因編輯也是一樣，沒有條件的話也可以用與該疾病無關的突變，比如MAPT突變之于AD。遺憾的是，雖然我們常用的小鼠已經(jīng)是背景基因極為一致的近交系了，但每只小鼠的生活軌跡在同窩小鼠中的地位都是有一定區(qū)別的，比如有的小鼠怕人，有的小鼠就不怕，是無法保證實驗的統(tǒng)一性的，要不為什么同樣品系的AD小鼠，同樣的實驗結(jié)果總是千差萬別。我們只能保證每次實驗中小鼠的分組和實驗操作保持一致性。

 

Q：黃博士您好，我們正在進行藥效實驗，一般選用哪個模型？

A：藥理實驗我以前用的是APP/PS1DeltaE9，這是雙轉(zhuǎn)里用得最多的。如果你們僅僅想看Aβ通路的表型，TG2576，APP/PS1DeltaE9和5×FAD都可以，要看對tau的影響就需要3×TG。

 

Q：老師，既然單基因突變更符合人類假說，那么多基因突變模型鼠更大的優(yōu)勢在哪里？

A：其實大部分單基因突變的效果不是很好，多轉(zhuǎn)基因小鼠有很多也是這樣，所以190多種動物里常用的就10種，但多基因可以在機理上研究不同基因過表達后的一些生理病理變化，在疾病機理的研究方面是有價值的，比如人只要有AD，就會有tau的過磷酸化和胞內(nèi)聚合物，而人的tau突變則對應的是FTD，而不是AD。但如果只針對APP和PS1建模，永遠得不到tau的病理表型，所以要研究tau的上下游功能和疾病機理，就需要人為讓tau的基因發(fā)生突變，產(chǎn)生tau的病理現(xiàn)象。另一方面，多轉(zhuǎn)基因也是為了讓小鼠具有更快更明顯的病理表型。總而言之，多基因突變小鼠模型的表型更早、更明顯。

 

Q：除了基因法，能不能用化學法做轉(zhuǎn)基因AD鼠？

A：有是有，有人介紹過，不過我看論文的經(jīng)驗是這20年出現(xiàn)很少了，畢竟最常用的基因編輯小鼠的表型很好了，需要信息的話請加我微信，我把那篇介紹的文章發(fā)給您。

 

Q：BACE失敗原因大概是什么呢？

A：可以引用在AD藥物研發(fā)中用了無數(shù)次的一句話來概括：當一個煙頭引發(fā)了一場森林大火以后，再如何撲滅這個煙頭已經(jīng)沒有意義了。因為用于臨床試驗的病患都是已經(jīng)確診的AD患者，這時候他們的病情早已發(fā)展了十幾年，很多其他的蛋白信號通路都已改變，積重難返了。

 

Q：帕金森動物模型有介紹嗎？

A：賽業(yè)生物神經(jīng)云課堂系列文章有介紹過，老師感興趣的話可以關注“賽業(yè)生物訂閱號”，點擊菜單賽業(yè)課堂—小鼠干貨—神經(jīng)科學，即可查看相關內(nèi)容。

 

術業(yè)有專攻，鑒于以下幾位老師的問題我沒有深入了解過，因此就只簡單地發(fā)表一下我了解的一些情況，如果老師有需要，可以后臺留言留下您的聯(lián)系方式，我咨詢做過這方面的老師幫您解答。

 

Q：還有一個問題是，關于藥物治療pd模型，有的文章是聯(lián)合用藥，有的文章是先構(gòu)建模型再藥物治療，有的是聯(lián)合用藥后mptp停用，治療藥物繼續(xù)治療，請問這幾種方法的區(qū)別以及他們能說明的問題？

A：抱歉，由于我沒做過PD，暫時無法解答這個問題，但是我可以幫你問問做過這塊的老師，看文獻的時候也會留意這個問題，老師可以先加我，我一有消息就聯(lián)系您。

 

Q: 我想問下另外一種神經(jīng)退行性疾病CMT2A，而且很多knock in 的基因突變的神經(jīng)退行性疾病沒有表型的原因有哪些呢？是不是由于人鼠物種的差異？

A：我不太熟悉CMT2A，以下回答只是我個人的觀點，如有錯誤，請多包涵。CMT2A是常染色體顯性遺傳病，KI的表型一般都比TG弱，畢竟TG大多是在強啟動子下的多拷貝，而KI是單拷貝，而且一般都用本身啟動子。至于人和鼠的差異要看具體基因的差別，以及這些差別是否決定了與蛋白剪切和結(jié)合相關。

 

Q：如果我們自己用Abeta多肽或東莨菪減等化合物來構(gòu)建腦損傷模型，這個做起來它們的個體差異怎么樣？

A：我沒做過這個藥物建模實驗，但據(jù)我了解，體外注射的個體差異要大于基因編輯小鼠。

 

Q：基因突變表現(xiàn)在蛋白上的位點如何體現(xiàn)呢，能否與分子模擬對接等手段相結(jié)合呢？

A：沒太看懂問題，一般基因編輯動物的描述中都會有M123A這種字母+數(shù)字+字母的表示來指蛋白位點，分子模擬沒接觸過，所以不懂，抱歉。

 

溫馨提示

 

賽業(yè)生物云課堂針對冠狀病毒、人源化小鼠、細胞培養(yǎng)、神經(jīng)科學等主題開展了一系列課程，錯過直播的老師可以通過以下方式進行回看：

 

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