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PUMC-mips-B1培養(yǎng)細(xì)胞株培養(yǎng)的無菌技術(shù)要點(diǎn)

瀏覽次數(shù):230 發(fā)布日期:2021-6-23  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B1培養(yǎng)細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn):
1. 實(shí)驗(yàn)開始前,無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌,用70%ethanol擦拭無菌操作臺面,并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后,才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株,即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基,以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后,請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺,用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后,才能進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。
2. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品,避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
3. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時放置,其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出,有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成,請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全,必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行(至少是Class II)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項(xiàng)目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)。
5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力,定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000小時/HEPA)。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。
人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺大動脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺動脈成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人支氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人小氣道上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人肺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人支氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人小氣道平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人支氣管成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人呼吸道上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人乳腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人乳腺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人前列腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人胰島β細(xì)胞完全培養(yǎng)基
發(fā)布者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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