磁珠預(yù)處理和實驗方法

瀏覽次數(shù)：2952　發(fā)布日期：2021-8-7　來源：MedChemExpress

磁珠的優(yōu)勢
◎ 蛋白荷載量高
◎ 特異性強(qiáng)、非特異性結(jié)合性低
◎ 樣品損失小
◎ 操作方便

如何操作
■ 磁珠預(yù)處理

將磁珠充分混懸，取 25-50 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 400 μL 結(jié)合/洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架，磁性分離，棄上清；重復(fù)以上洗滌步驟 2 次。

■ 實驗方法

Step 1. 裂解細(xì)胞并準(zhǔn)備用于免疫沉淀的樣品。

Step 2. 預(yù)處理樣品：通過將裂解樣品單獨(dú)與珠子或與無關(guān)抗體結(jié)合，以除去能與 IP 組分非特異性結(jié)合的任何蛋白質(zhì)。

Step 3. 使用針對目的蛋白的抗體孵育溶液，用直接法或用間接法將抗體固定在磁珠上。繼續(xù)孵育，以形成抗體-目的蛋白復(fù)合物。

Step 4. 沉淀微珠-抗體-目的蛋白復(fù)合物，去除上清液。

A/G 磁珠的 IP 實驗

Step 5. 洗滌沉淀的復(fù)合物數(shù)次。使用磁珠時，每次洗滌置于磁性分離架上即可除去上清液。最后一次洗滌后，需要除去盡可能多的上清液。

Step 6. 使用低 pH 或 SDS 樣品上樣緩沖液從磁珠上洗脫蛋白質(zhì)。

Step 7. 分析目的蛋白或蛋白復(fù)合物：SDS-PAGE，染色，質(zhì)譜，Western Blotting 等。

注：具體操作細(xì)節(jié)，還需仔細(xì)閱讀對應(yīng)產(chǎn)品說明書

■ MCE 磁珠產(chǎn)品

MCE 磁珠產(chǎn)品
HY-K0202 Protein A/G Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL細(xì)胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0203 Protein A Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL細(xì)胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0204 Protein G Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL細(xì)胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0201 Anti-HA Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL細(xì)胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白純化
HY-K0206 Anti-c-Myc Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL細(xì)胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白純化
HY-K0207 Anti-Flag Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL細(xì)胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白純化
HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads
每次結(jié)合使用 100 μL 磁珠	IP/Co-IP/ChIP/細(xì)胞分選/蛋白純化/核酸雜交