在體多通道記錄技術(shù)的應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)流程
大腦與神經(jīng)元
人類(lèi)大腦由大約 100 億個(gè)神經(jīng)元組成,神經(jīng)元之間通過(guò)突觸相互連接成復(fù)雜的功能網(wǎng)絡(luò),因而大腦是人體最復(fù)雜的器官。目前,人們對(duì)大腦的功能機(jī)制的認(rèn)知還停留在較低的水平,研究大腦的功能也成為科學(xué)家的終極目標(biāo)。
2013 年 1 月,人腦工程成為歐盟「未來(lái)新興旗艦技術(shù)項(xiàng)目」之一,未來(lái) 10 年內(nèi)將獲得 10 億歐元的科研經(jīng)費(fèi)。隨后,奧巴馬宣布將從 2014 財(cái)年的政府預(yù)算中拿出 1 億美元,啟動(dòng)"人腦活動(dòng)圖"項(xiàng)目研究(Brain Activity Map project)。這兩大腦科學(xué)研究計(jì)劃勢(shì)必將掀起神經(jīng)科學(xué)研究的熱潮。
神經(jīng)元,又稱(chēng)神經(jīng)原或神經(jīng)細(xì)胞,是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和行使功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長(zhǎng)突起的細(xì)胞,它由細(xì)胞(Soma)和細(xì)胞突起-軸突(Axon)和樹(shù)突(dendrite)構(gòu)成。
神經(jīng)元與神經(jīng)元之間會(huì)發(fā)生頻繁的信號(hào)傳遞與交互,從而構(gòu)成非常復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。神經(jīng)元之間的信號(hào)傳遞依賴(lài)于細(xì)胞膜上的離子通道(Ion channel)。離子通道的開(kāi)閉會(huì)引起膜內(nèi)外離子的交換,如 Na+/K+ 離子,從而引起膜電位的變化。
所以說(shuō)神經(jīng)元的信號(hào)傳遞會(huì)伴隨著電活動(dòng),當(dāng)達(dá)到一定閾值時(shí),便可引發(fā)動(dòng)作電位(A c t i o n p o t e n t i a l)。檢測(cè)神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏陌l(fā)生變成為研究神經(jīng)活動(dòng)的主要方法,比如傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)。
在體多通道記錄技術(shù)(in-‐vivomultichannelrecording)
傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)是一種離體的記錄方法(in-vitro), 主要是針對(duì)離體
培養(yǎng)的細(xì)胞和腦片進(jìn)行記錄,而且大多是單通道記錄,一次只能記錄一個(gè)細(xì)胞,通量不高。隨后發(fā)展出了 MEA 技術(shù),即 Multi-ElectrodeArray,利用多電極陣列對(duì)細(xì)胞或腦片進(jìn)行記錄,這樣就變成了多通道記錄,解決了通量的問(wèn)題。
然而,離體狀態(tài)下的記錄與動(dòng)物的本來(lái)狀態(tài)還是相去甚遠(yuǎn),尤其是研究動(dòng)物在某種活動(dòng)狀態(tài)下的神經(jīng)活動(dòng)更加是不能實(shí)現(xiàn)。所以在體或活體狀態(tài)的多通道記錄便是迫切需要。
在體多通道記錄(in-vivo multichannel recording)是在活體狀態(tài)下研究動(dòng)物神經(jīng)活動(dòng)的一種方法。將電極陣列植入動(dòng)物的大腦某皮層或區(qū)域,電極后續(xù)接入高靈敏度的放大器及記錄系統(tǒng),將記錄到的模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào),在配套的記錄軟件上變可以觀察到放電信號(hào)。
在體多通道記錄的實(shí)驗(yàn)流程
在體多通道記錄主要包括動(dòng)物手術(shù)、電極植入、信號(hào)記錄采集及數(shù)據(jù)分析等步驟。
- 動(dòng)物手術(shù):
以大小鼠為例,將
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉,常用戊巴比妥鈉或水合氯醛靜脈注射的方法,有條件也可使用氣體麻醉。去除動(dòng)物頭頂處的毛,將動(dòng)物固定在腦立體定位儀上,然后將頭皮剪開(kāi),將
組織清理干凈,露出頭骨,可以比較清晰的看見(jiàn)骨縫。利用骨縫進(jìn)行定位,確定電極植入的位置。用顱骨鉆在顱骨開(kāi)天窗,一般方形的窗比較常用。小心取下骨片,再在天窗對(duì)側(cè)腦區(qū)打下幾個(gè)螺釘孔,用來(lái)固定顱骨螺釘,一般打 2 至 4 個(gè)。用 1 ml 注射器針頭小心去除硬腦膜,盡量避免出血。
(2)電極植入:
先固定顱骨螺釘,使得螺釘接觸到腦組織,但又不過(guò)分壓迫。用電極夾持器夾住電極,先定位在天窗上方,將電極的地線(xiàn)纏繞在顱骨螺釘上。講電極尖端緊挨腦組織表面。然后,用微推進(jìn)器緩慢向下推進(jìn)(建議使用高精度的電動(dòng)微推進(jìn)器),使得電極進(jìn)入腦組織。注意推進(jìn)的速度,使電極緩慢到達(dá)想要記錄的腦區(qū)。
(3)信號(hào)記錄:
連接好記錄系統(tǒng),包括CerePlex™系列微型數(shù)字放大器,主機(jī),電腦等。打開(kāi)記錄軟件,觀察放電信號(hào)。待觀察到穩(wěn)定且信噪比較高的信號(hào),便可開(kāi)始記錄。在記錄同時(shí)還可以同時(shí)接入其他外源事件和刺激,如電刺激、光刺激。
除了麻醉狀態(tài)下記錄,還可以讓動(dòng)物清醒狀態(tài)下進(jìn)行記錄。這樣便可結(jié)合動(dòng)物行為學(xué),讓動(dòng)物完成各種任務(wù)并同時(shí)進(jìn)行記錄。
(4)信號(hào)分析:
記錄好數(shù)據(jù)之后,便可進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
康森特生物科技(長(zhǎng)沙)有限公司代理的在體多通道神經(jīng)電生理系統(tǒng)用于動(dòng)物神經(jīng)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),功能強(qiáng)大且操作簡(jiǎn)便。可以滿(mǎn)足用戶(hù)的不同實(shí)驗(yàn)需求,對(duì)頭部固定或清醒自由活動(dòng)動(dòng)物進(jìn)行高通量、低噪聲的高質(zhì)量數(shù)據(jù)記錄。
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