在本方案中,我們將用于兩種不同細胞類型的共培養。供體細胞和受體細胞可以單獨生長,但共享相同的培養基以通過可溶性因子/蛋白質進行通訊。
共培養實驗流程
1.打開μ-Slide2孔共培養載玻片的包裝,并將其放在μ-Slide架子或其他合適的表面上。準備您的受體細胞,并使用40-60μl細胞懸液將其接種到中央小孔中。根據您的細胞,我們建議5-10x104cell/ml。
2.準備您的供體細胞,并將其接種到外部小孔中,每孔使用40-60μl細胞懸液。當使用ibiTreat(經過親水性組織培養處理)表面時,外部8個孔之間可能會發生一些混合。不要用培養基潤濕內孔的走道,并小心處理玻片,以免在細胞附著之前混合培養基。
3.細胞附著后,清空各個孔溶液以防止細胞混合。用40-60μl培養基洗滌9個小孔,以去除非貼壁細胞。之后,將400-600μl培養基填充到每個大孔中。這將連接9個小孔,從而允許兩種細胞通過培養基進行通訊。
μ-Slide2孔共培養載玻片還允許在凝膠基質內培養細胞球體,并與接種在外孔中的供體細胞結合。在下面的圖片中,有一個多細胞球狀體,例如內皮細胞嵌入膠原蛋白凝膠中。在中心小孔中生長的球狀體可以在癌細胞附近培養,這些癌細胞可以釋放出可溶性因子。像膠原I型凝膠這樣的水性3D凝膠基質不會阻礙分子擴散。
與ibidiCulture-Insert2孔一起進行2D共培養,ibidiCulture-Insert2孔可用于將不同類型的細胞鋪到一個培養容器中,彼此相鄰。它僅用作在指定區域播種細胞的模具。去除培養插件后,不同的細胞類型會彼此緊鄰而無障礙地生長。
μ-Slide共培養,可以創建單個細胞模式。根據所使用的板或培養皿,可以單獨選擇細胞數量和培養基體積。
在3D矩陣中共同培養細胞
ibidimicro-Insert4孔提供了小孔,可以填充混合到3D凝膠基質中的細胞。這樣,可以在共享一個液體的同時分別培養不同類型的懸浮或貼壁細胞?梢愿鶕枰占蚪粨Q,而無需將細胞沖洗出凝膠。