什么是細(xì)胞遷移能力？

細(xì)胞遷移是最古老也是最重要的動(dòng)物細(xì)胞生理活動(dòng)之一，看似簡(jiǎn)單的一個(gè)動(dòng)作實(shí)際上是高度動(dòng)態(tài)和協(xié)調(diào)的復(fù)雜過(guò)程，包括胞外信號(hào)誘導(dǎo)、微絲系統(tǒng)提供動(dòng)力、整合素介導(dǎo)的黏附結(jié)構(gòu)提供附著力等。

細(xì)胞跨出的每一小步，是機(jī)體化學(xué)調(diào)控的一大步，在胚胎發(fā)育、組織形成、免疫活動(dòng)、損傷修復(fù)等生理過(guò)程，以及炎癥、癌癥轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程中都有著極其重要的作用。

因此拒絕細(xì)胞“拖延癥”，密切關(guān)注細(xì)胞遷移能力，成為細(xì)胞診斷的必修課！

什么是細(xì)胞小室？
 

細(xì)胞小室在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中很常用。這是一類有通透性的杯狀的裝置，可以認(rèn)為這是一種膜濾器，也可認(rèn)為是一種有通透性的支架。
 

上室底部的薄膜是整個(gè)實(shí)驗(yàn)裝置的核心部分，需要具有通透性、可觀察性、高化學(xué)兼容性。

NEST選用具有全面化學(xué)適用性的聚酯膜及聚碳酯膜，通過(guò)TC處理后便于細(xì)胞貼壁培養(yǎng)。

聚碳酸酯膜（PC）

膜孔密度較高，允許通過(guò)膜完成更多交換，而且具有優(yōu)秀的細(xì)胞粘附特性，所以適用于轉(zhuǎn)運(yùn)研究和其他需要實(shí)現(xiàn)最佳細(xì)胞生長(zhǎng)的應(yīng)用。

另外PC膜也非常適用于屏障分析。在較長(zhǎng)時(shí)段內(nèi)相比其他膜材料，具有更高、更持續(xù)且更穩(wěn)定的跨上皮電阻 (TEER) 值。PC膜無(wú)需基質(zhì)包被即可培養(yǎng)大多數(shù)類型細(xì)胞。

 聚脂膜（PET）

PET膜孔密度較低，具有更好的光學(xué)清晰度，有利于顯微鏡細(xì)胞觀察以及細(xì)胞成像。

待測(cè)細(xì)胞的直徑?jīng)Q定了薄膜孔徑的選擇。通常情況下，薄膜的孔徑應(yīng)略小于細(xì)胞的直徑以防止細(xì)胞直接漏入到下室。

NEST提供多種規(guī)格孔徑，滿足共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲以及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)多種需求。
 

小于 3μm 孔徑的小室，細(xì)胞不會(huì)遷移通過(guò)。涉及到細(xì)胞遷移的實(shí)驗(yàn)，要用 5.0、8.0μm的小室，這樣上室細(xì)胞可穿過(guò)聚碳酸酯膜進(jìn)入下室。
 

鑒定方式

1）首先，細(xì)胞處理∶處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化細(xì)胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2遍，用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸。

2）鋪板∶24孔板下加入600ul含10%FBS的培養(yǎng)基，取細(xì)胞懸液150μl加入細(xì)胞小室，每孔，10000個(gè)細(xì)胞。

3）細(xì)胞培養(yǎng)∶37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20~24h。

4）固定∶取出細(xì)胞小室，棄去孔中培養(yǎng)液、用無(wú)鈣的PBS洗2遍，4%多聚甲醛固定30分鐘甚至過(guò)夜。

5）染色∶0.1%結(jié)晶紫染色20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，用PBS洗3遍。

6）顯微鏡下計(jì)數(shù)。
 

 

注意事項(xiàng)

1.細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)一定要盡量嚴(yán)格，以保證各孔細(xì)胞密度均勻。為了避免各孔間由于細(xì)胞計(jì)數(shù)引入的誤差，一般需要重復(fù)三個(gè)副孔。 

2.種細(xì)胞時(shí)盡量從孔的中間位置滴加，力度柔和，速度盡量慢，以免沖擊力太大破壞膠面；

3.避免氣泡產(chǎn)生。注意小室底部氣泡的產(chǎn)生。小室在放入孔板時(shí)，常常會(huì)因?yàn)橐后w表面張力的原因在小室底部形成氣泡，氣泡導(dǎo)致的底部液面不均會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞侵襲和遷移能力， 因此在放置小室時(shí)，應(yīng)輕柔勻速，若發(fā)現(xiàn)底部產(chǎn)生氣泡，不要拍打板子(這樣做會(huì)使剛鋪好的細(xì)胞重新聚團(tuán))，而應(yīng)將小室輕輕提起，重新放置直至無(wú)氣泡。

診斷報(bào)告
 

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