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谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

瀏覽次數(shù):1478 發(fā)布日期:2022-5-26  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:
Gu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一,而且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外,Glu 還是味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

測(cè)定原理:
利用專(zhuān)用提取液提取,然后用顯色劑進(jìn)行顯色,顯色后在 570nm 下進(jìn)行測(cè)定。

需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;臨用前加入 10mL 蒸餾水,充分混勻溶解,用不完的試劑仍 4℃保存。
谷氨酸提取:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 1000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 2mL 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.2g 組織,加入 2mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積(mL):試劑一體積(mL)為 1:5~10的比例(建議取 0.2mL 血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入 2mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 在有蓋 EP 管中加入下列試劑:
試劑名稱(μL)  測(cè)定管   對(duì)照管
樣本 1000
試劑一 1000
試劑二 200  200
混勻,90℃水浴 20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,于 570nm 波長(zhǎng)處比色,△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。谷氨酸含量計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0074x- 0.5255;x 為谷氨酸含量(µg/mL),y 為吸光值。
2、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2)=1351×(△A+0.5255)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
谷氨酸含量(µg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,2 mL;V3:加入血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積,0.2 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;1000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),1000 萬(wàn)。
注意:
1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測(cè)定,檢測(cè)下限為 100µg/mL。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為:100µg/mL -600µg/mL。
3、ΔA 線性范圍為:0.01-2;若大于 2 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
發(fā)布者:上海雅吉生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-34661276
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