自實體組織分離是動物細胞的主要來源，目前生物制藥領域應用廣泛的細胞株如CHO細胞、293細胞、Vero細胞等最初均分離自不同動物的組織器官。那如何最有效分離出想要的單細胞呢？無論是原代細胞獲取還是成熟細胞株的消化傳代，細胞消化都是關鍵的一環，今天逐典給大家整理一篇細胞消化大全，方便您更好的選擇適合自己實驗的產品。

細胞消化在不同領域的應用

1. 原代細胞

直接從生物體獲取的組織更接近于生物體內的生活狀態，且生物性狀尚未發生很大改變，因此在藥物篩選、細胞移植、類器官培養、腫瘤研究等眾多領域備受歡迎。針對不同組織采用不同的消化酶能使解離過程更加高效，酶解法也是主要的細胞解離方式，主要以胰蛋白酶為主，輔助添加其他蛋白酶增強活力。

2.細胞傳代

以單層生長的細胞彼此之間以及與培養皿發生蛋白質接觸，一般細胞長至80%-90%密度需要傳代消化，貼壁細胞傳代前，需要把細胞用消化試劑從培養容器表面解離出來，細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養基的新容器內。消化方法以酶解法為主，胰蛋白酶是最常用的解離試劑。

圖2.不同培養規模的細胞傳代

通常的細胞消化策略：

• 小規模的細胞收集可使用吹打或細胞刮刀
• 形成蛋白緊密連接的，可采用胰蛋白酶
• 上皮細胞等可表達鈣粘蛋白的細胞，在酶消化基礎上需添加EDTA等螯合劑

為了保持細胞活力，消化反應條件應與細胞接觸的強度相匹配。

如果將反應強度與細胞系的粘附特性相匹配，但細胞仍難以去除，則在生長培養基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素，例如血清，可以通過在添加解離試劑之前用PBS簡單地沖洗細胞一次或兩次來克服。此外，形成特別強的多層細胞融合也是需要注意的。
 

毫無疑問，胰蛋白酶作為原代細胞獲取、細胞傳代消化中必不可少的原料之一，在生物制藥工藝中也是重要的生產原輔料。應用于生物制藥工藝意味著更高的質量標準，動物來源、藥典要求、生產級別、批間穩定性等都是胰蛋白酶產品的重要指標！
 

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