注   意 ：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：
植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標(biāo)。

測定原理：
葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可計(jì)算得葉綠素a和葉綠素b以及總?cè)~綠素含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、10mL玻璃試管、錫箔紙、丙酮。

試劑組成和配制 ：
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。          

測定操作：

• 稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。
• 提取液的準(zhǔn)備：取120mL蒸餾水和480mL丙酮，充分混勻待用。
• 加入1mL蒸餾水，少量試劑一（約50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉(zhuǎn)入10mL玻璃試管。
• 用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管，用提取液定容至10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘?jiān)�完全變白則提取完全，若組織殘?jiān)�未完全變白，繼續(xù)浸提至其完全變白。
• 取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿，提取液調(diào)零，測定663nm和645nm處吸光值，分別記為A₆₆₃和A₆₄₅ 。

 
計(jì)算公式：
葉綠素a含量（mg/g 鮮重）=（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000
                    = 0.01×（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×D÷m
葉綠素b含量（mg/g 鮮重）=（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000
                    = 0.01×（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×D÷m
葉綠素總含量（mg/g 鮮重）=（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000
                    = 0.01×（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×D÷m
V提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數(shù)；m：樣本質(zhì)量，g
 
注意事項(xiàng)：

• 葉綠素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進(jìn)行。
• 一定要浸提至組織殘?jiān)�完全變白，否則提取不充分。
• 用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質(zhì)被轉(zhuǎn)移至玻璃試管。
• 測定時(shí)吸光值超過1，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。