多樣化的抗體庫對有效的體液免疫是必不可少的。產(chǎn)生和維持這種多樣性的機制因物種而異。在小鼠和人類中，抗體（Ab）多樣性的一個主要貢獻者是多個V、(D)和J基因片段在重(H)和輕(L)鏈位點的組合重排。有的物種則依靠重排后的體細胞多樣化機制——體細胞基因轉(zhuǎn)換（Somatic gene conversion，SGC）和體細胞超突變（Somatic hypermutation，SHM）來構(gòu)建初級Ab庫。在小鼠和人的T細胞依賴性免疫反應(yīng)中，Ig基因在生發(fā)中心通過體細胞超突變實現(xiàn)多樣化，很少發(fā)現(xiàn)體細胞基因轉(zhuǎn)換。綿羊胎兒和新生綿羊發(fā)育過程中的Ab基因多樣性依賴于體細胞超突變而非基因轉(zhuǎn)換。雞的VH、VL基因片段多樣化的主要機制是基因轉(zhuǎn)換。而兔子同時使用體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變機制來多樣化IgH庫。
 
體細胞基因轉(zhuǎn)換最先在雞的Ig基因中被描述，是上游供體V基因片段和重排的V(D)J基因之間的同源、單向重組。這種基因轉(zhuǎn)換的結(jié)果是，重排的V(D)J基因獲得了上游V基因段的部分序列。而體細胞高突變是通過一種未知的機制對高頻率點突變進行靶向積累。體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變均可促進初級Ab基因庫的多樣性。
 
兔初級抗體庫多樣化發(fā)生的位置
綿羊胎體的體細胞超突變多樣化主要發(fā)生在回腸Peyer氏斑塊，雞胚的囊體基因轉(zhuǎn)換多樣化發(fā)生在雞胚，而在幼兔中，VDJ基因的體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變多樣化發(fā)生在腸道相關(guān)淋巴組織(GALT)中。GALT在兔子V(D)J重排后的初級Ab庫多樣化過程中起著關(guān)鍵作用。研究人員在6周齡兔闌尾濾泡中獲得克隆相關(guān)VDJ基因序列中觀察到體細胞類基因轉(zhuǎn)換突變和點突變。當(dāng)從出生后不久的兔子(GALT較少)中移除有組織的GALT（包括闌尾、圓球囊和Peyer氏斑塊）時，通過體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變的Ig基因多樣性顯著延遲。
 
體細胞多樣化機制打破VH1優(yōu)先重排限制
兔IgH抗體庫80-90%的VDJ基因重排受限于3`-最多的VH基因片段VH1的優(yōu)先重排。體細胞基因轉(zhuǎn)換和體細胞超突變可以打破這種限制，多樣化初級Ab基因庫。這種多樣化開始于兔齡4周，主要發(fā)生在GALT中。研究人員從FITC特異性雜交瘤和腘淋巴結(jié)(PLN)中刮取的Ag誘導(dǎo)生發(fā)中心中,獲得克隆相關(guān)的VDJ基因序列。在對相關(guān)克隆的D區(qū)和V區(qū)上游供體基因片段序列的突變研究,發(fā)現(xiàn)持續(xù)的體細胞超突變和基因轉(zhuǎn)換。體細胞基因轉(zhuǎn)換和體細胞超突變都是在免疫反應(yīng)過程中Ag誘導(dǎo)的克隆擴增過程中引入的。當(dāng)然，兔的體細胞基因轉(zhuǎn)換可以作為外周免疫反應(yīng)的一部分，在GALT外發(fā)生。
 
體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變對親和力成熟的不同意義
在小鼠和人類的免疫反應(yīng)期間通過超突變實現(xiàn)的體細胞多樣化對于親和力成熟至關(guān)重要，Ag誘導(dǎo)的體細胞基因轉(zhuǎn)換也起到類似的作用。雞的體細胞基因轉(zhuǎn)換發(fā)生在初級免疫反應(yīng)的早期（第7天）的脾臟生發(fā)中心，超突變在同一免疫反應(yīng)的后期積累。首先體細胞基因轉(zhuǎn)換產(chǎn)生多種B細胞受體，然后通過超突變微調(diào)免疫反應(yīng)。
 
兔子在免疫反應(yīng)期間同時使用體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變來多樣化IgH基因。VH區(qū)內(nèi)的體細胞基因轉(zhuǎn)換和超突變發(fā)生在相似的時間和位置，作用于相同的VDJ基因序列。對于親和力成熟來說，體細胞基因轉(zhuǎn)換與超變有很大不同。通過體細胞基因轉(zhuǎn)化可以快速產(chǎn)生許多變異的B細胞受體。在Ag特異性免疫反應(yīng)的背景下，體細胞基因轉(zhuǎn)換（尤其是在CDR內(nèi)）可能會改變Ag受體的特異性，而非增加親和力。但B淋巴細胞在成年兔中的生成是有限的，因此不會持續(xù)產(chǎn)生新的特異性Ag受體。體細胞基因轉(zhuǎn)換與Ag誘導(dǎo)的外周受體編輯相似，可能會增加Ab庫的整體多樣性，挽救注定死亡的細胞。
 
德泰生物采用SingleB快速單抗開發(fā)技術(shù)，48天即可獲得100株體內(nèi)天然成熟的兔單抗，抗體親和力可達皮摩爾級，保證FACS Binding。
 
參考文獻
Candace R. Winstead, Shi-Kang Zhai, Periannan Sethupathi, et al. Antigen-Induced Somatic Diversification of Rabbit IgH Genes: Gene Conversion and Point Mutation[J].J Immunol,1999; 162 (11): 6602–6612.