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櫻花OCT冷凍切片包埋劑的制備步驟

瀏覽次數(shù):1140 發(fā)布日期:2023-3-2  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。 因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而多應用于手術中的快速病理診斷。

制備步驟: 將組織在恒溫冷凍機里面切片。 冷凍腔內的溫度一般設置為-18℃至-25℃,根據(jù)不同組織調節(jié)不同腔溫,平時應將冷凍頭放置在冷凍臺上。 冷凍切片機應長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。

1、當冰凍組織提取好之后,在冷凍頭上放少量的OCT或羧甲基纖維素(可用普通膠水代替),放上組織,速凍;
2、待組織凍結后,將冷凍頭裝刀切片機上;
3、粗切,修出切面細切幾張,用毛筆刷去刀上組織片;
4、放下抗卷板,開始切片,切片速度一般為5-6微米,切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定,固定時間為10-20秒。

注意事項:
1、速凍是冰凍切片的關鍵,因為只有速凍才能減少組織內的冰晶,好的辦法就是將速凍頭迅速壓在組織上,切好后就可以凍片,特別適用于較脆的組織。
2、固定切片后應立即放入甲醇冰醋/酸中固定,不能等切片干后再固定,后者容易造成細胞退變。 固定液有很多種,甲醇作用快、收縮小、染色較清晰,是冰凍切片最理想的固定液,而每97ml加入冰酸醋3ml,會減少某些膠質、鈣質較多的組織不容易掉片。
3、包埋劑可用普通膠水代替,但要加入適量的水(膠水與水的比例大約在2:1)。 太稀了容易損傷切片刀,太稠了黏在刀上不容易洗掉,影響切片的質量。
4、冰凍用切片刀不僅要磨得快,而且要磨得直,否則切出來的片子就會不平整,不能進入抗卷板(最好使用一次性刀片)。
5、如組織發(fā)脆,可以等幾分鐘后再切,也可用手在組織上稍微加溫;如果用手去摸組織塊,最好戴手套,或用玻片間的紙夾在手與組織之間,以防感染。
6、冷凍室的室溫冬天一般設置在-19℃左右,夏天設置在-22℃左右。 不同的組織有不同的溫度要求,如肝臟、甲狀腺組織溫度應設置在-15℃左右,脂肪組織一般設置在-35℃以下。
7、冷凍切片機應長期處于恒溫冷凍狀態(tài),經常的開關電源容易造成設備損壞
發(fā)布者:上海聯(lián)碩生物科技有限公司
聯(lián)系電話:400 0918 500
E-mail:lianshuo@vip.126.com

標簽: 包埋劑
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