A1：類器官中多種不同類型的細(xì)胞，可以在體外自我分化自我組裝，具有干性可以進(jìn)行傳代；腫瘤球只有單一細(xì)胞。

 

A2：動物源性的樣本一般比人源的更容易污染，尤其是一些胃腸、泌尿系統(tǒng)，培養(yǎng)過程可以添加一些慶大霉素或者抗生素。

 

A3：一般IC50用的比較多。

 

A4：因?yàn)轭惼鞴僦杏卸喾N細(xì)胞類型，并且是一個腔狀的結(jié)構(gòu)，所以不會吸收不到營養(yǎng)。

 

A5：組織的大小建議黃豆大小；IPS主要是干細(xì)胞誘導(dǎo)的，周期比較長，優(yōu)點(diǎn)在于純度比較高，但是一般不能傳代。

 

A6：類器官做藥篩是目前的一個新的趨勢，后續(xù)應(yīng)用會更廣泛一些。

 

A7：一般建議是長到200-300um可以加藥，傳代的第2代或者第3代。

 

A8：IC50 主要是對藥物敏感性的判斷，與用藥的濃度是有一定關(guān)系的。

 

A9：舉例：如果是檢測化合物，化合物中都有IC50值，我們直接擴(kuò)大1000倍。

 

A10：可以加基質(zhì)膠，也可以不加。

 

A11：用DMSO做對照即可。

 

A12：主要看類器官的干性，干性比較好可以傳20代以上；凍存液需要類器官專用的無血清凍存液。

 

A13：主要看類器官生長的情況，一般是100-200um.如果類器官初始體積就比較大，直徑會更大一些。

 

A14：原理上是可以的，把基質(zhì)膠鋪薄一些讓其貼壁，再把培養(yǎng)基換成常規(guī)血清培養(yǎng)基。

 

A15：因?yàn)樵�代�?xì)胞是單一細(xì)胞系，一些增殖的基因會起到抑制作用，但是類器官中是有干細(xì)胞的，每一代的類器官中都有一些具有干性的原代祖細(xì)胞，所以可以一直傳代，而且類器官的培養(yǎng)基可以保持細(xì)胞干性，抑制其分化能力。

 

A16：一種是觀察明場圖片，另外就是終點(diǎn)法，像比較常見的CCK8、ATP細(xì)胞活性檢測、活死染色法也可以。

 

A17：比較常見的是CCK8檢測、ATP細(xì)胞活性檢測、活死染色法。

 

A18：建議3-5代是比較好的。

 

A19：常規(guī)顯微鏡4倍鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)即可；另外可以用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。

 

A20：200-300um;建議是在加藥后120小時以上。

 

A21：這種屬于腫瘤球構(gòu)建。

 

A22：有專用的類器官消化液，還可以借助一些機(jī)械的消化手段，一般是1-2min,千萬不要用胰酶消化。

 

A23：用我們愛必信的消化液是10-15min,常規(guī)文獻(xiàn)中的要根據(jù)不同組織類型去判斷。

 

A24：可以的，但是純度是不一樣的。

 

A25：藥物并一定要滲入到深層，作用一部分的就會起作用，因?yàn)轭惼鞴僦�間是相互作用的，這一點(diǎn)區(qū)別于腫瘤球，主要是腫瘤球中間是沒有縫隙的。

 

A26：差別比較大的，每個類器官的形態(tài)都是有一定的區(qū)別。

 

A27：建議每2天拍一次，培養(yǎng)過程多進(jìn)行觀察，有條件可以每日觀察。

 

A28：每個孔建議是50個類器官，因?yàn)轭惼鞴贈]有辦法計(jì)數(shù)，所以每個孔多少還是會有差距。

 

A29：不建議這樣操作，建議把類器官懸浮在緩沖液或者培養(yǎng)基中進(jìn)行染色。

 

A30：是正常的。因?yàn)榉卧陂L過程是會有一個M1型到M2型的轉(zhuǎn)化的。

 

A31：不同廠家離心力不同，提議自己摸索實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)速，適當(dāng)提高。