ELISA實驗常用樣本采集和處理的方式詳解
酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。ELISA 實驗的樣本種類很多，有血清，血漿，細胞裂解液，細胞培養上清，尿液，肺泡灌洗液，腦脊液，各種組織勻漿等，每種樣本采集和處理的方式都不相同。通過整理出以下方法僅供參考。
一、血清
1、采血后室溫靜置20min或更長時間至血清析出。
2、將采集的血液用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的 ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染，因為菌體中可能含有含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。血清標本宜在新鮮時檢測。如在冰箱中保存過久，在間接法ELISA中可使本底加深。
二、血漿
1、取血后加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉等），混合10-20分鐘后，30分鐘內于冰上分離血漿以減少血小板的污染（也可以直接用抗凝管采集）。
2、將采集血液用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
注意事項：制備血漿標本需借助于抗凝劑EDTA,抗凝不完全的標本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。請注意指標說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求，建議使用EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。
三、尿液
1、采集尿液樣本500ul，加入無菌試管中。
2、用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的樣本小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
四、細胞培養上清
1、用無菌試管收集細胞培養上清液。
2、用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
五、細胞裂解液
1、取細胞培養板或細胞懸液，用PBS（PH7.2-7.4）洗滌細胞培養板1-2次。
2、通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑（裂解液），使細胞破壞并放出細胞內成份。
3、用離心機4℃，2000rpm離心20min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
4、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
六、 組織勻漿
1、采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結締組織，稱取組織塊。
2、用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天熱時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3、勻漿的方式有多種：
a) 手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
b)、機器勻漿：用組織搗碎機10000～15000r/min上下研磨制成10％組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續3～5次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
c)、超聲粉碎：用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用40安培，5秒/次，間隙10秒反復3～5次。
4、將制備好的10％勻漿用離心機4℃，3000rpm離心15min，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
5、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
保存時間：
一般ELISA檢測樣本在2-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月。
一、血清
1、采血后室溫靜置20min或更長時間至血清析出。
2、將采集的血液用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的 ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染，因為菌體中可能含有含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。血清標本宜在新鮮時檢測。如在冰箱中保存過久，在間接法ELISA中可使本底加深。
二、血漿
1、取血后加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉等），混合10-20分鐘后，30分鐘內于冰上分離血漿以減少血小板的污染（也可以直接用抗凝管采集）。
2、將采集血液用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
注意事項：制備血漿標本需借助于抗凝劑EDTA,抗凝不完全的標本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。請注意指標說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求，建議使用EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。
三、尿液
1、采集尿液樣本500ul，加入無菌試管中。
2、用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的樣本小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
四、細胞培養上清
1、用無菌試管收集細胞培養上清液。
2、用離心機4℃，2000rpm離心15min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
3、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
五、細胞裂解液
1、取細胞培養板或細胞懸液，用PBS（PH7.2-7.4）洗滌細胞培養板1-2次。
2、通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑（裂解液），使細胞破壞并放出細胞內成份。
3、用離心機4℃，2000rpm離心20min左右，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
4、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
六、 組織勻漿
1、采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結締組織，稱取組織塊。
2、用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天熱時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3、勻漿的方式有多種：
a) 手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
b)、機器勻漿：用組織搗碎機10000～15000r/min上下研磨制成10％組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續3～5次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
c)、超聲粉碎：用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用40安培，5秒/次，間隙10秒反復3～5次。
4、將制備好的10％勻漿用離心機4℃，3000rpm離心15min，將離心好的勻漿小心收集上清，棄下面沉淀。
5、取上清并分裝保存備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
保存時間：
一般ELISA檢測樣本在2-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月。
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