冠狀病毒是有包膜的單鏈RNA病毒，其刺突蛋白（S蛋白）可與動物身體上的受體細胞結合，繼而入侵到動物體內(nèi)。豬腸道冠狀病毒（PECs）是商業(yè)豬群中高發(fā)的一類冠狀病毒，主要包括：流行性腹瀉病毒（PEDV）、傳染性腸胃炎病毒（TGEV）和豬三角冠狀病毒（PDCoV）。目前PECs主要通過RT-PCR、免疫組化和病毒中和檢測等方法進行鑒別和診斷。盡管PECs在致病性上存在差異，但它們在臨床和組織病理學上都難以區(qū)分，因此利用其遺傳特性開發(fā)新的快速檢測手段至關重要。在單個反應體系中同時檢測多個標記物，對于快速識別和分類相關病原體是一種嘗試手段。S蛋白氨基末端S1亞基的受體結合域是血清學診斷的高敏感性和特異性抗原靶點，本研究則描述了一種基于病毒特異性重組S1蛋白的ELISA樣多重平面免疫分析方法，蛋白點印在微孔板底部，同時檢測血清樣本中的PEDV、TGEV和PDCoV。工作原理與ELISA相似，樣本結合強度與陣列中特定病毒抗原靶標的抗體水平相關。
 

該文章發(fā)表在Journal of Immunological Methods雜志，作者來自于美國愛荷華州立大學獸醫(yī)學院。ELISA對多個病原體的抗體水平檢測涉及到多個工作流程，不僅耗時而且也增加了成本和錯誤風險。使用多重平面免疫分析法，可同時對三種主要的PECs（PEDV、TGEV和PDCoV）進行血清學診斷。微陣列中樣本矩陣的獨特設計，同比色法相比，不僅減少了試劑消耗也降低了檢測成本，而且更快速、更高靈敏度。具體方法：S1蛋白的結構域編碼區(qū)在質(zhì)粒載體和HEK293細胞中表達，進行純化后，分別使用SDS-PAGE和Western blot進行表達結果驗證，實驗中480份血清樣本批次接種PEDV、TGEV（Purdue和Miller亞型）和PDCoV的第（-7、0、7、14、21、28、35和42）天，在微孔板中進行孵育，隨后加入特異性識別IgG的酶標抗體，以及底物四甲基聯(lián)苯胺（TMB）進行顯色，并使用德國Sensovation的多因子檢測芯片掃描儀進行數(shù)據(jù)讀取和分析，實驗設計流程見圖1。

結果顯示：PEDV S1的診斷敏感性為92%（44/48陽性），TGEV S1為100%（95/95陽性），PDCoV S1為98%（47/48陽性），見圖2。

結果表明，AgroDiag PEC多重免疫分析法是一種有效、可靠檢測PECs的血清學診斷方法。

Sensovation 成立于2000年�？偛课挥诘聡�，一直致力于研發(fā)和生產(chǎn)科學級成像設備。Sensovation多因子檢測芯片掃描儀可對兼容96孔板和各種生物芯片，也可與自動進樣裝置和液體處理工作站進行整合。在基因組和蛋白組表達，基因突變，病毒微生物檢測，腫瘤特異性標志物篩查，自身免疫抗體分析等領域都有非常廣泛的應用。

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