siPOOL——改進(jìn)和節(jié)省您的RNAi篩選實(shí)驗(yàn)

為什么要做RNA干擾（RNAi）？

RNA干擾（RNAi）是一種廣泛用于研究基因功能的基因沉默工具。這是由于它擁有多種優(yōu)勢：易于使用、適用于各種細(xì)胞類型、類似藥物的特性、可快速獲得結(jié)果等。然而，眾所周知，合成的短干擾RNA（siRNAs），通常會(huì)存在脫靶效應(yīng)，這將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定，因此后續(xù)還需要開展更多的驗(yàn)證工作，既費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。 如果采用高復(fù)雜度的siRNAs池（簡稱siPOOLs），可以大大降低脫靶效應(yīng)，進(jìn)一步提高RNAi方法在基因功能研究中的可靠性和效率。

siPOOLs如何提高特異性？

siPOOLs是由優(yōu)化設(shè)計(jì)合成的30條siRNA組成的復(fù)雜混池。采用高復(fù)雜度的混池方法，使每條siRNA的濃度均相應(yīng)降低，致使特異性siRNA的脫靶效應(yīng)得以稀釋。相反地，siPOOLs具有較高的轉(zhuǎn)錄組覆蓋率，可以進(jìn)一步提高基因敲除的效率。由此產(chǎn)生的功能表型結(jié)果也更加的可靠，重復(fù)性也更好。

左：在相對較高的濃度下使用單個(gè)siRNA或低復(fù)雜度siRNA池，以實(shí)現(xiàn)有效的敲除。然而，高濃度可能會(huì)導(dǎo)致普遍的脫靶效應(yīng)，從而產(chǎn)出易變的結(jié)果。右：siPOOLs是由30條特定的siRNAs構(gòu)成的復(fù)雜混池，具有不同的種子序列，能夠較大限度地覆蓋靶標(biāo)基因。采用混池化方法將每條siRNA的濃度降低。較低的濃度可有效消除脫靶效應(yīng)，并提高基因沉默結(jié)果的可靠性。

我們提供專業(yè)的技術(shù)支持

我們的團(tuán)隊(duì)是由具備多年RNAi篩選經(jīng)驗(yàn)的專家組成，在siRNA設(shè)計(jì)和RNAi篩選數(shù)據(jù)分析（包含siRNA和基于shRNA的篩選）方面有深入的專業(yè)研究，可以為您的RNAi檢測開發(fā)和篩選研究提供科學(xué)、專業(yè)的技術(shù)支持。

與時(shí)俱進(jìn)的siPOOL文庫

為了確保siPOOLs針對當(dāng)前注釋的基因，設(shè)計(jì)團(tuán)隊(duì)會(huì)根據(jù)新版的RefSeq注釋不斷更新siPOOL的設(shè)計(jì)。

通常，siPOOLs產(chǎn)品采用攜帶條形碼的離心管。也可根據(jù)客戶需求定制96孔板或384孔板布局的siPOOLs產(chǎn)品。

運(yùn)輸和保存

siPOOL庫，以懸液的形式保存，常溫（RT）下運(yùn)輸。如有特別要求，siPOOL也可以干粉形式運(yùn)輸。siPOOL庫可以穩(wěn)定地在RT下運(yùn)輸至少4周。到達(dá)后，siPOOL庫應(yīng)存儲(chǔ)在-20℃至-80℃。在這樣的條件下，siPOOL庫至少穩(wěn)定保存兩年。如果siPOOL庫以干粉形式運(yùn)輸，siPOOL需采用無RNase的水進(jìn)行重懸。

在客戶收到（或重懸）siPOOLs產(chǎn)品后，我們建議您將siPOOLs分裝成小體積，存儲(chǔ)在-20℃到-80℃條件。為了達(dá)到最佳效果，盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)。在良好的儲(chǔ)存條件以及規(guī)范的操作處理下，siPOOLs可穩(wěn)定保存至少2年。

引用文獻(xiàn)

Hannus M. et. al.: siPools: highly complex but accurately defined siRNA pools eliminate off-target effects. Nucleic Acids Res 42(12): 8049-61(2014)

Marine S. et. al.: Common Seed Analysis to Identify Off-Target Effects in siRNA Screens. Journal of Biomolecular Screening 1-9 (2011)

Jackson A. et. al.: Expression Profiling reveals off-target gene regulation by RNAi. Nature Biotechnology (2003)