文獻(xiàn)信息

今年，貴州大學(xué)醫(yī)學(xué)院、北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所，核醫(yī)學(xué)科，國(guó)家藥監(jiān)局放射性藥物研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)化研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、西南醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院等團(tuán)隊(duì)合作的研究成果Development of a CLDN18.2-targeting immuno-PET probe for non-invasive imaging in gastrointestinal tumors（用于胃腸道腫瘤非侵入性成像的CLDN18.2靶向免疫PET探針的研制）在學(xué)術(shù)期刊《Journal of Pharmaceutical Analysis》（JCR Q1, SCI IF 14.026）發(fā)表。平生公司的小動(dòng)物PET/CT（型號(hào)：Super Nova）產(chǎn)品在論文中提供了重要的腫瘤小鼠PET/CT圖像和定量分析。

該研究的通訊作者為北腫楊志主任和朱華研究員。第一作者為陳艷。

文獻(xiàn)背景

Claudin18.2（CLDN18.2）是一種緊密連接蛋白，在多種實(shí)體腫瘤如胃腸道癌癥和食道癌癥中過(guò)度表達(dá)。它已被確定為診斷腫瘤、評(píng)估療效和確定患者預(yù)后的一個(gè)有前途的靶點(diǎn)和潛在的生物標(biāo)志物。TST001是一種重組人源化CLDN18.2抗體，其選擇性結(jié)合人Claudin182的細(xì)胞外環(huán)。在本研究中，作者構(gòu)建了固體靶放射性核素鋯-89（⁸⁹Zr）標(biāo)記的TST001，以檢測(cè)其在人胃癌BGC823^CLDN18.2細(xì)胞系中的表達(dá)。[⁸⁹Zr]Zr-desferrioxamin（DFO）-TST001具有較高的放射化學(xué)純度（RCP，>99%）和比活性（24.15±1.34 GBq/μmol），在5%人血清白蛋白和磷酸鹽緩沖鹽水中穩(wěn)定（96h時(shí)RCP>85%）。TST001和DFO-TST001的EC50值分別高達(dá)0.413±0.055和0.361±0.058nM（P>0.05）。注射后2天（P.i.），放射性示蹤劑在CLDN18.2陽(yáng)性腫瘤中的平均標(biāo)準(zhǔn)攝取值明顯高于CLDN18.2陰性腫瘤（1.11±0.02 vs. 0.49±0.03，P=0.0016）。BGC823^CLDN18.2小鼠模型在96小時(shí)內(nèi)顯示出高腫瘤/肌肉比率，[⁸⁹Zr]Zr-DFO-TST001的攝取遠(yuǎn)高于其他成像組。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，BGC823^CLDN18.2腫瘤對(duì)CLDN18.2高度陽(yáng)性（＋＋＋），而B(niǎo)GC823組的腫瘤不表達(dá)CLDN18.2（-）。離體生物分布研究結(jié)果表明，在BGC823^CLDN18.2荷瘤小鼠中的分布（2.05±0.16%ID/g）高于BGC823小鼠（0.69±0.02%ID/g）和阻斷組（0.72±0.02%ID/g）。一項(xiàng)劑量估計(jì)研究表明，[⁸⁹Zr]Zr-DFO-TST001的有效劑量為0.0705 mSv/MBq，在核醫(yī)學(xué)研究的可接受劑量范圍內(nèi)。總之，這些結(jié)果表明，蓋技術(shù)可以檢測(cè)CLDN18.2過(guò)表達(dá)的腫瘤。

實(shí)驗(yàn)方法

正常昆明（KM）小鼠和BGC823^CLDN18.2/BGC823模型裸鼠通過(guò)尾靜脈注7.4MBq[⁸⁹Zr]Zr-DFO-TST001（n=3）。然后在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)（注射后2、24、48和72小時(shí)）進(jìn)行10分鐘的靜態(tài)PET掃描。作為非特異性對(duì)照組，BGC823^CLDN18.2小鼠（n=3）提前6小時(shí)禁食，然后通過(guò)尾靜脈注射7.4 MBq的¹⁸F-FDG。在¹⁸F-FDG PET成像之前和成像期間用2%異氟烷麻醉小鼠。使用小型動(dòng)物PET/CT掃描儀（Super Nova PET/CT，平生醫(yī)療科技有限公司），通過(guò)Avatar 3.0（平生醫(yī)療科技有限公司）重建PET圖像，并通過(guò)繪制這些器官的ROI來(lái)計(jì)算感興趣區(qū)域（ROI）的SUV。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

[⁸⁹Zr]Zr-DFO-TST001的體內(nèi)分布和代謝特征是在放射性示蹤劑注射后的2、24、48、72和96小時(shí)通過(guò)小動(dòng)物PET/CT成像實(shí)時(shí)和無(wú)創(chuàng)地評(píng)估的。同時(shí)，作者建立了以下三個(gè)對(duì)照組，分別被過(guò)量的TST001、BGC823細(xì)胞中CLDN18.2的陰性表達(dá)和[⁸⁹Zr]Zr-DFO-IgG的非特異性靶向（7.4MBq）阻斷（圖4A）。通過(guò)概述免疫PET圖像的ROI，收集BGC823^CLDN18.2或BGC823小鼠器官的SUVmean數(shù)據(jù)（圖4B-E）。

圖4.注射[⁸⁹Zr]Zr-desferrioxamine(DFO)-TST001或[⁸⁹Zr]Zr-DFO-IgG的BGC823^CLDN18.2或BGC823腫瘤小鼠的小動(dòng)物正電子發(fā)射斷層掃描（PET）圖像。（A）4個(gè)不同組在2、24、48、72和96小時(shí)的小動(dòng)物PET圖像。（B）BGC823^CLDN18.2小鼠、（C）具有未標(biāo)記TST001阻斷劑的BGC823^CLDN18.2小鼠和（D）BGC823小鼠的器官中[⁸⁹Zr]Zr-DFO-TST001的標(biāo)準(zhǔn)攝取值平均值（SUVmean）。（E） BGC823^CLDN18.2小鼠器官中[⁸⁹Zr]Zr-DFO-IgG的SUV平均值。

為了¹⁸F-FDG進(jìn)行比較，給予BGC823^CLDN18.2荷瘤小鼠¹⁸F-FDG.并每小時(shí)收集圖像（圖5A）。結(jié)果表明，CLDN18.2陽(yáng)性小鼠對(duì)¹⁸F-FDG的攝取與背景攝取相似。[⁸⁹Zr]Zr-DFO-TST001在BGC823^CLDN18.2小鼠中48小時(shí)p.i.的腫瘤積聚約為阻斷組的4.11倍、BGC823組的2.27倍和[⁸⁹Zr]Zr-DFO-IgG組的2.06倍（SUV平均值分別為1.11±0.02、0.27±0.01、0.49±0.03、0.54±0.06）（圖5B）。

圖5.小動(dòng)物正電子發(fā)射斷層掃描（PET）成像分析。（A） 將48小時(shí)p.i.腫瘤攝取的切片圖像與BGC823^CLDN18.2小鼠1小時(shí)p.i.中¹⁸F-氟脫氧葡萄糖（¹⁸F-FDG）的切片圖像進(jìn)行比較（B）48小時(shí)時(shí)不同實(shí)驗(yàn)組小鼠器官中器官的標(biāo)準(zhǔn)攝取值平均值（SUVmean）。

文獻(xiàn)結(jié)論

作者成功地制備了GMP級(jí)抗CLDN18.2重組人源化抗體TST001的⁸⁹Zr標(biāo)記。[⁸⁹Zr]Zr-DFOTST001在細(xì)胞水平上表現(xiàn)出良好的特異性和快速的腫瘤積聚，在24-96小時(shí)內(nèi)保持陽(yáng)性。它為實(shí)時(shí)檢測(cè)治療性抗體在人類中的治療效果提供了一種有前途的分子探針。它還為未來(lái)CLDN18.2治療靶向患者的篩查和療效評(píng)估提供了可能性。

                                                      Super Nova^® Micro PET/CT（III 代外觀圖）