近些年，以干細胞治療為基礎的再生醫學逐漸發展起來。間充質干細胞（mesenchymal stem cell, MSC）作為干細胞的一種，正受到全世界科學家的關注。

間充質干細胞（MSC）是一類存在于多種組織（如骨髓、臍帶、胎盤、脂肪等），具有自我更新能力和多向分化潛力的成體干細胞。具有易獲取、低免疫原性、低致瘤性、良好增殖率等多個特點，因在免疫調節和組織再生上的巨大潛力而受到更多的關注。

Duc M Hoang教授2022年發表了一篇綜述[1]，對間充質干細胞（MSC）在各系統疾病治療領域的最新臨床研究成果進行了系統性的總結，包括神經系統疾病、肺功能障礙、代謝/內分泌相關疾病、生殖障礙、皮膚燒傷和心血管疾病等。文中提到，在臨床試驗中，MSC治療是安全的，不過仍需要進行大規模的臨床試驗。MSC來源特異性的疾病治療也是研究者關注的一個方向。

截止2023年8月底，我國已有近70種MSC藥物獲得藥物臨床試驗申請（IND）受理（數據來源于國家藥品監督管理局藥品評審中心），涉及較多的適應癥，包括膝骨關節炎、間質性肺病、移植物抗宿主病及急性呼吸窘迫綜合征。

圖1：MSC來源及分化（來源：DOI:10.1080/17474124.2018.1393332）

在間充質干細胞的研究中，細胞的鑒定是很重要的一個環節。

自1991年MSC的概念提出后，科學家們使用不同的分離培養方法，用不同的標志物來研究MSC，沒有形成統一的鑒定標準，增加了MSC研究的難度。因此，國際細胞治療協會（ISCT）在2006年定義了MSC的最低標準[2]，是目前被廣泛接受的一種鑒定方法， 如Table1所示：

層浪LongCyte™流式細胞儀檢測MSC表面標志物的數據。

實驗方案：

圖2：MSC表面標志物配色方案

染色步驟：

Part.1
取傳代培養的人臍帶間充質干細胞（h UCMSCs），胰酶消化收集細胞，加入PBS調整細胞濃度為10 x106 cells/ mL；

Part.2
取7個流式管，每管分別加100ul細胞懸液，空白管不加抗體，其余的管按照抗體使用說明書分別加入相應熒光抗體CD90-FITC、CD105-PE、CD73-APC、CD45-PE-Cy7、CD34-APC-Cy7、HLA-DR-AF700，混勻，室溫避光孵育30 min；

Part.3
加2mlPBS，1500r，離心5 min，棄上清液，加入300ulPBS重懸細胞；

Part.4
上流式細胞儀，檢測細胞表面標志物的表達。

數據展示：

圖3：MSC表面標志物檢測（A：主細胞群；B-G：分別是陽性指標CD73、CD105、CD90和陰性指標HLA-DR、CD34、CD45的百分比）

圈門邏輯：

01通過FSC-H/SSC-H設門，排除碎片，圈出主細胞;

02建立直方圖，橫坐標分別選擇CD73、CD105、CD90、HLA-DR、CD34、CD45；

03在儀器軟件上選擇圖層編輯功能，與空白管對應指標的直方圖進行疊加，得到每個指標的百分比。

總結:

1.層浪LongCyte™流式細胞儀軟件操作簡單，可直接獲得峰形疊加圖，進行歸一化和平滑處理，對流式圖進行美化處理；

2.有批量操作功能，可批量自動上樣，批量分析數據，批量導出流式圖，節約整體實驗時間。層浪臨床型LongCyte™3光14色流式細胞儀可滿足多種熒光染料同時使用，歡迎大家使用層浪流式細胞儀，共同探索更多的多色流式檢測方案。 

  圖4：層浪生物LongCyte™3光14色流式細胞儀

參考文獻：

（1）Duc M. Hoang , Phuong T. Pham,etal.Stem cell-based therapy for human diseases.
Signal Transduct Target Ther.2022 Aug 6;7(1):272.

（2）Dominici, M，Le Blanc, K,etal.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

（3）F Gao 1, S M Chiu,etal.Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects.Cell Death Dis,2016 Jan 21;7(1):e2062.

（4）Hajir Ibraheim 1, Chiara Giacomini,etal.Advances in mesenchymal stromal cell therapy in the management of Crohn's disease.Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2018 Feb;12(2):141-153.