一，動態(tài)顯色法原理

革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素催化了LAL中酶原的活化 。初始活化速率由內(nèi)毒素的濃度決定�；罨�后的酶催化了無色底物 Ac-lle-Glu-Ala-Arg-pNA釋放出pNA。在整個孵育過程中，用光度法連續(xù)測量405nm處的游離pNA。通過將其反應(yīng)時間與標(biāo)準曲線比較，計算出樣品中的內(nèi)毒素濃度。

酶原 內(nèi)毒素 凝固酶

底物 + H2O 酶肽 肽 + pNA
 

二，動態(tài)濁度法原理

濁度法是通過檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化來檢測內(nèi)毒素含量的鱟試驗法。動態(tài)濁度法是檢測反應(yīng)混合物的濁度到達某一預(yù)先設(shè)定的吸光度或透光率所需要的反應(yīng)時間，或是檢測濁度增加速度的方法。隨著凝膠的形成，反應(yīng)液吸光值的增加、OD值增加速率和內(nèi)毒素的濃度呈正相關(guān)。
 

三，光度法檢測所需主要設(shè)備、材料

試劑

– 鱟試劑（LAL）（Kinetic-QCL™ 或 PYROGENT™-5000 試劑）

– 內(nèi)毒素工作標(biāo)準品 (CSE)

– LAL溶解緩沖液（用于PYROGENT™-5000動態(tài)濁度法LAL 試驗）

– LAL 試劑檢查用水（即LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀釋管(# N207)

– 獨立包裝的血清吸管（選購）

– 標(biāo)簽

– 96-微孔板 (# 25-340)

– 試劑槽(# 00190035)

請使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具。

設(shè)備和軟件

– 八道移液器

– 光吸收酶標(biāo)儀

– WinKQCL™軟件

– 移液器

– 計時器

– 漩渦混合器

四，操作步驟

本指南分步描述了如何進行傳統(tǒng)動態(tài)法鱟試劑（以下簡稱LAL）試驗。試驗開始前，先使試劑瓶溫度與室溫相同。還應(yīng)打開孵育酶標(biāo)儀，并在WinKQCL軟件中創(chuàng)建微孔板模板。

五，注意事項

– 使用配套的LAL和 CSE 試劑

– 建議勿使用塑膠管稀釋內(nèi)毒素

– 遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議

– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具

– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同

– 不要對LAL進行漩渦震蕩

– 將試劑放入96-微孔板的孔中時，避免產(chǎn)生氣泡

– 不要污染樣品、標(biāo)準品、LRW 和器具

– 應(yīng)正確安裝、驗證并維護設(shè)備儀器