免疫組織化學（IHC）是一種非常有價值的工具，用于檢測、定位和量化保存組織中的抗原，以達到研究和診斷的目的。這種方法因其方便、可靠和多功能性而被廣泛用于診斷和研究。在IHC中，抗原抗體復合物可通過熒光檢測顯現出來。不過，它們通常是通過光顯微鏡來觀察的，而不是使用顏色信號，這種方法被稱為顯色檢測。與免疫熒光技術相比，顯色IHC的優勢在于通過蘇木精復染，特異抗原周圍的組織形態清晰可見。染色IHC標記的結果以半定量方式報告，具有重要的診斷和預后意義，特別是在區分良性和惡性病變方面。
 

圖1. 小鼠抗CD44抗體（克隆號SFF-304）和兔抗Ki-67抗體（克隆號MIB-1）與MULTIVIEW® PLUS（mouse-HRP/rabbit-AP）試劑盒（ENZ-KIT181-0150，Enzo Life）配合使用，進行多重免疫組化染色，蘇木精用作復染劑。

原位雜交

原位雜交（ISH）是一種獨特的分子分析方法，因為它能在顯微鏡下精確定位中期染色體涂片、細胞和組織中的DNA、mRNA和microRNA等核酸。1969年8月，兩個獨立的研究小組首次對該方法進行了描述。原則上，ISH包括：(a)細胞或組織樣本的固定和預處理，以最佳方式保存目標核酸；(b)標記探針通過互補堿基配對與目標雜交；最后，(c)檢測標記，以便在顯微鏡下觀察雜交。與IHC相似，探針的檢測可通過顯色或熒光技術實現，分別稱為顯色原位雜交（ISH）或熒光原位雜交（FISH）。FISH已成為對可能最終導致癌癥發生的基因畸變進行分子分析的一種特別強大的工具。
 

圖2. Nick Translation DNA Labeling System 2.0（ENZ-GEN111-0050，Enzo Life）用Orange 552 dUTP（ENZ-42842，Enzo Life）標記TP53的BAC DNA 探針，用Green 496 dUTP（ENZ-42831，Enzo Life）標記中心粒17的BAC DNA 探針。標記的探針與中期染色體涂片雜交。(圖片來源于盧茲腫瘤大學研究所）

IHC在癌癥中的應用

IHC 是一種利用單克隆和多克隆抗體檢測組織切片中特定抗原的方法，是癌癥研究人員和外科病理診斷醫師的一個非常強大的工具。通過IHC，可以確定相關抗原在健康和疾病狀態下的組織分布。IHC被廣泛應用于癌癥研究和診斷，因為特定的腫瘤抗原只有在某些癌癥類型中才會重新表達或上調。因此，IHC在研究和病理學中發揮著重要作用，尤其是在腫瘤病理學、神經病理學和血液病理學等亞專業領域。雖然組織的基本組織學檢查仍被認為是有用和必要的步驟，但IHC能提供更多更詳細的見解。IHC可用于癌癥研究中的各種應用，如腫瘤標志物的鑒定和監測、腫瘤診斷（尤其是來源不明的腫瘤）、腫瘤預后以及預測乳腺癌和前列腺癌的治療反應。
 

圖3. 宮頸組織先用抗Ki-67抗體（小鼠）染色，然后用生物素偶聯的抗小鼠二抗染色，再用SAVIEW® PLUS HRP Reagent（ENZ-ACC102-0150，Enzo Life） 染色。

ISH在癌癥中的應用

FISH是一種功能強大的技術，主要用于檢測染色體異常。FISH的靈敏度高、特異性強、檢測速度快，使其成為一項舉足輕重的細胞遺傳學技術，在血液惡性腫瘤和實體瘤的研究和診斷方面都取得了重大進展。從醫學角度看，FISH可用于檢測基因畸變，如基因融合、非整倍體或染色體缺失。它還可用于監測畸變的進展或鑒定新的致癌基因。現在，病毒感染在某些癌癥類型的發展中的重要性已被廣泛證實，ISH也為人類乳頭瘤病毒（HPV）感染相關癌癥的診斷和研究提供了一個強大的工具。Enzo Life于1986年開發出第一款用于ISH檢測的非放射性HPV探針，可用于監測細胞和組織樣本中病毒載量。
 

圖4. 用PATHO-GENE® HPV 16/18/31/33/51（ENZ-32882，Enzo Life）篩查宮頸組織，然后用SAVIEW® PLUS HRP Reagent（ENZ-ACC102-0150，Enzo Life）進行篩查。