ELISA試劑盒試驗(yàn)中的溫育全面解讀
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
一、溫育時(shí)刻:
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。
二、ELISA試劑盒溫育溫度：
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時(shí)，試驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂峰。為加速反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為完全，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長，在ELISA中一般不予選用。
三、溫育保溫：
保溫的方法除有的ELISA儀qi附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺上即可。
實(shí)際測定操作注意事項(xiàng)：
1、不同的溫育環(huán)境對檢測結(jié)果有影響，操作中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書控制溫育時(shí)間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應(yīng)。
2、為確保各板溫度都能迅速達(dá)到平衡，不可將反應(yīng)板疊加放置，設(shè)定的溫度及時(shí)間嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，一般加入待測標(biāo)本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因?yàn)楹芏嗪銣叵涞臉?gòu)造，溫度及檢測的溫度并非酶標(biāo)板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時(shí)建議將溫度計(jì)置于酶標(biāo)板旁，保證酶標(biāo)板旁溫度為37℃。
3、干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。
4、試劑盒一般設(shè)定的反響溫度為 37℃，在這個(gè)溫度下放置 30 分鐘，蒸騰的水分會許多，對于全部反響體系來講，各種反響物的濃度會不斷添加，這么必會致使反響畢竟的值添加，溫育時(shí)貼封片或加蓋，避免標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁。
5、試劑盒斷定的一定溫度下的反響時(shí)間并不是反響的完畢，添加反響的溫度，會加速反響，一樣添加時(shí)間會延伸反響，這么得到的反響程度會比試劑盒斷定的反響程度多，也會引起陰性高值或假陽性。
6、實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)謹(jǐn)性與實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應(yīng)儲存于2-8℃，使用時(shí)應(yīng)回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合使用，要經(jīng)常檢查酶標(biāo)儀和微量移液器的精度和準(zhǔn)備度…… ELISA看起來很簡單，但是在實(shí)際操作過程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)也是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的保證！
一、溫育時(shí)刻:
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。
二、ELISA試劑盒溫育溫度：
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時(shí)，試驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂峰。為加速反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為完全，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長，在ELISA中一般不予選用。
三、溫育保溫：
保溫的方法除有的ELISA儀qi附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺上即可。
實(shí)際測定操作注意事項(xiàng)：
1、不同的溫育環(huán)境對檢測結(jié)果有影響，操作中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書控制溫育時(shí)間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應(yīng)。
2、為確保各板溫度都能迅速達(dá)到平衡，不可將反應(yīng)板疊加放置，設(shè)定的溫度及時(shí)間嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，一般加入待測標(biāo)本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因?yàn)楹芏嗪銣叵涞臉?gòu)造，溫度及檢測的溫度并非酶標(biāo)板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時(shí)建議將溫度計(jì)置于酶標(biāo)板旁，保證酶標(biāo)板旁溫度為37℃。
3、干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。
4、試劑盒一般設(shè)定的反響溫度為 37℃，在這個(gè)溫度下放置 30 分鐘，蒸騰的水分會許多，對于全部反響體系來講，各種反響物的濃度會不斷添加，這么必會致使反響畢竟的值添加，溫育時(shí)貼封片或加蓋，避免標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁。
5、試劑盒斷定的一定溫度下的反響時(shí)間并不是反響的完畢，添加反響的溫度，會加速反響，一樣添加時(shí)間會延伸反響，這么得到的反響程度會比試劑盒斷定的反響程度多，也會引起陰性高值或假陽性。
6、實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)謹(jǐn)性與實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應(yīng)儲存于2-8℃，使用時(shí)應(yīng)回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合使用，要經(jīng)常檢查酶標(biāo)儀和微量移液器的精度和準(zhǔn)備度…… ELISA看起來很簡單，但是在實(shí)際操作過程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)也是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的保證！
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