⼈腎⽪質近曲⼩管上⽪細胞(HK-2)培養要點
瀏覽次數:619 發布日期:2024-10-18
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HK-2細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2;Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,最后將PA317細胞產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示,HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實,HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。
細胞名稱:人腎皮質近曲小管上皮細胞(STR鑒定正確)
細胞簡稱:HK-2
產品貨號:TCH-C400
種屬來源:人
組織來源:腎
細胞形態:上皮細胞樣
生長特性:貼壁生長
培養體系:MEM+10% FBS+1% P/S
配套培養基貨號:TCH-G400
傳代比例:1:3-1:4,每2-3天換液一次
傳代周期:24-48 h
培養條件:氣相:95%空氣+5%CO2,溫度:37℃
凍存條件:60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲存
質量檢測:細菌、真菌、支原體檢測均為陰性
1. 出現空泡
空泡問題需要結合⽣⻓速度和形態來看:如果⽣⻓速度和形態正常,空泡可能是正常的細胞活動,傳代后空泡即可減輕。
如果⽣⻓較慢,形態異常,空泡可能是⾃噬⾏為,可加⼤⾎清⽐例(不超過20%)或更換⾎清品牌改善細胞狀態。
2. 出現拉絲
細胞伸出細⻓的絲有兩種情況:
第⼀種:細胞遷移造成的,細胞在培養⽫上并不是靜態的,也會出現遷移。遷移時細胞的⼀部分滯留在原處,遷移的過程中會拉出⼀條細⻓的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數,細胞整體的⽣⻓狀態是正常的,不⽤特殊處理。
第⼆種:細胞營養不良,拉絲的細胞占⼤多數,同時細胞⽣⻓緩慢,此時可以提⾼⾎清⽐例(不超過20%)或添加5 ng/mL EGF。
3. 形態不對
正常的HK-2呈鋪路⽯狀⽣⻓,如果細胞呈鐮⼑狀或不規則狀,可能是因為培養環境發⽣了較⼤的改變,⽐如從有⾎清到⽆⾎清的轉換,此時換回原來的培養條件細胞可逐漸恢復;如果細胞變得細⻓,這時候可能是營養不良。
4. ⽣⻓緩慢
在標準培養條件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3傳代條件下,HK-2的傳代周期約為3天;
當細胞⽣⻓緩慢,⼀周⽆法傳代時,需要考慮培養基特別是⾎清是否合適;選擇合適的培養基及⾎清,同時加⼤細胞接種密度可以改善;
⾎清質量差異可能引起細胞狀態變化,建議選⽤⾼質量的胎⽜⾎清。