生物實驗剛剛上手，緩沖液、培養基種類層出不窮，配方一個一個不好找？萌 CeCe 來幫您，本期是各類實驗需要的配方分享！
 
01
微生物培養、富集相關
 

培養基，是指供給微生物或離體細胞生長繁殖的，由不同營養物質按特定比例配置而成的混合物，為細胞提供適宜的生長繁殖環境。

(1) 細菌培養基
 

 
(2) 真菌培養基

[1]：用于釀酒酵母可以加入后葡萄糖 115 ℃ 20 min 高溫滅菌，但用于畢赤酵母培養時建議將葡萄糖溶液過濾除菌后加入避免產生葡萄糖的高溫碳化。
 
培養基按其物理狀態可分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基三類。

• 固體培養基，是在液體培養基中加入凝固劑 (e.g. 瓊脂、明膠、硅膠) 而呈現固體狀態的一類培養基，一般凝固劑含量為 1.5%-2.0% (以瓊脂糖為例)，固體培養基通常用于微生物分離、鑒定、計數等。

• 半固體培養基，是在液體培養基中加入少量凝固劑而呈現半固體狀態的一類培養基，一般凝固劑的含量為 0.5%-0.8% (以瓊脂糖為例)，半固體培養基常用于觀察微生物的運動特征，鑒定菌種等。
• 液體培養基，不含有任何凝固劑，成分均勻，常用于大規模工業生產及在實驗室進行微生物的基礎理論研究。

 
表內提供的大多為液體培養基配方，大家可以根據自己的實驗需求添加瓊脂配成固體或半固體培養基。另外正常配置的過程是不需要額外調 pH 的，但如果發現生長效率過低可以復查一下配置過程中是否 pH 有問題哦~

02
質粒構建篩選相關

 
(1) 質粒提取 

堿裂解法是目前質粒提取最常用的一種方法，當菌體在氫氧化鈉和 SDS 溶液中裂解時，蛋白質與 DNA 發生變性，當加入中和液后， 質粒 DNA 分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；而蛋白質與染色體 DNA 呈絮狀，可通過離心沉淀至管底。后續可對質粒通過其他方式純化 (如乙醇沉淀法、柱式純化法)。

[2]：使用時需要額外加入 RNaseA (HY-129046) 溶液 。
[3]：溶解菌體時間不能過長，顛倒混勻操作盡量輕柔。

(2) 質粒篩選：抗生素溶液 

在質粒篩選的過程中需要根據構建質粒的抗性選擇不同的抗生素溶液，下表列出了幾種較為常見的抗生素溶液的配置方法，建議配置后分裝保存，避免反復凍融影響篩選效果。另外提供抗生素溶液的配方都是儲存液的配方，使用的時候還要根據自己實驗的菌株、質粒的具體篩選濃度稀釋成對應的濃度使用哦~

[5]：TAE 緩沖液使用最為廣泛，適合大分子量 DNA 片段的分離，可用于 DNA 回收；TBE 緩沖液緩沖能力強，分辨率高于 TAE 體系，但緩沖液中的硼酸成分會影響 DNA 回收效率。
[6]：TBE 易析出，長期保存建議以低濃度形式保存。
[7]：瓊脂糖膠的分辨率和膠濃度有關，膠濃度越高分辨率越高，相應的濃度越高的瓊脂糖凝固也越快。

05
蛋白實驗相關

(1) 蛋白裂解

[8]：DTT 低溫儲存容易析出，可 37 ℃ 水浴加熱或室溫放置一段時間至溶液充分溶解后使用。

 
(2) 蛋白電泳膠 

▐ Tris-Gly-SDS 體系：

• 濃縮膠配方：

• 分離膠配方：

 
▐ Tricine-SDS-PAGE 體系：

• 丙烯酰胺-雙丙烯酰胺 AB-3 (49.5% T，3%C Mixture)：48 g 丙烯酰胺、1.5 g 雙丙烯酰胺溶于 100 mL 超純水中。

• 丙烯酰胺-雙丙烯酰胺 AB-6 (49.5% T，6%C Mixture)：46.5 g 丙烯酰胺、3g 雙丙烯酰胺溶于 100 mL 超純水中 (用于分離分子量 ＜5Kda 的小蛋白或多肽)。

• Gel Buffer (3 ×): 7.266 g Tris、0.06 g SDS 溶于 20 mL 水，調節 pH 至 8.45。

 
(4) 染色、脫色液