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間充質干細胞MSC誘導分化與染色實用指南

瀏覽次數:7101 發布日期:2019-9-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

間充質干細胞(MSC)具有多向分化的潛能,在體外一定條件下可以誘導分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞。
BI  NutriStem® MSC系列擁有眾多明星產品,除了NutriStem® MSC無血清培養基,也提供MSC誘導分化試劑—MSCgoTM XF Differentiation Kits

為何選擇MSCgoTM XF Differentiation Kits ?
不含血清,無異源,
促進多種來源hMSC分化為
成骨、成脂細胞、成軟骨細胞
分化效果更加明顯
成骨分化可短至7天。

  
  成脂分化                   成骨分化                    成軟骨分化

如何做好干細胞誘導分化?  

成骨
1. 接種hMSC:用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀釋) 預包被24孔盤,每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF,接種6x104細胞 (3x104cells/Cm2)。
(注意:若使用其他培養器皿,請適當調整體積。)
2. 置于37°C,5% CO2培養箱中培養。
3. 分化:培養24h后即細胞融合度達到80%時,將MSC NutriStem® XF 培養基吸除,每孔加入0.5ml分化培養基。
(注意:若細胞融合度<80%,繼續再培養一天。)
4. 置于37°C,5% CO2培養箱中培養10-21天,每2-3天換液。
(注意:培養時間越長,越容易礦化,ARS染色更明顯。)
5. 成骨評價:使用2%的ARS染色液。
 

 
成脂

接種hMSC

1. 用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀釋) 預包被24孔盤,每孔加入0.5ml MSC  NutriStem® XF,接種6x104 細胞 (3x104 cells/cm2)。注意:若使用其他培養器皿,請適當調整體積。
2. 置于37°C,5% CO2培養箱中培養。

分化
1. 培養24h后即細胞融合度達到80-90%時,將MSC NutriStem® XF 培養基吸除,每孔加入0.5ml分化培養基。
注意:若細胞融合度<80%,繼續再培養一天。
2. 置于37°C,5%CO2 培養箱中培養14-21天,參照以下建議的替代培養基。

根據hMSC類型的替代培養基方法

不同來源的hMSC具有不同的多向分化潛能。例如,hMSC-AT需要較短的誘導期(~ 6天),而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天誘導期。
注意:對于所有不同類型的hMSC,誘導成脂后建議使用維持培養基。避免將液體直接加入到脂肪細胞上,需要非常小心移液,因為脂肪細胞是脆弱的。

hMSC-AT:
1. 一個分化周期/維持培養基6-8天使用完全成脂分化培養基,建議每3-4天換液。
2. 成脂誘導完成后,用維持培養基MSC  NutriStem® XF(05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培養基,培養3-4天。

hMSC-BM:
1. 一個分化周期/維持培養基8-12天使用完全成脂分化培養基,建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。
2. 成脂誘導完成后,用維持培養基(MSC  NutriStem® XF (05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培養基,培養3-4天。

hMSC-CT:

1. 至少兩個分化周期/維持培養基5-10天使用完全成脂分化培養基,建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。
2. 成脂誘導完成后,用維持培養基(MSC  NutriStem® XF (05-200-1,05-201-1)替代分化培養基,培養3-6天,每2-4天換液。
3. 重復培養周期直到觀測到成熟脂肪細胞(即脂滴的形成)。

成軟骨

1. 接種hMSC,3D培養在 96-well U-bottom培養板中每孔加入100μl MSC  NutriStem® XF,接種1x105細胞 (30-40x104 cells/cm2)。無需預包被。
注意:微量培養技術也是一個選擇并且可以激發球形細胞的形成:接種10μl 1x104cells/ml 入板的中心(最終1x105cells/well),使其貼壁2小時,然后加入培養基0.1ml/well。

2. 置于37°C,5% CO2培養箱中培養。在24-48小時內會自發形成球狀體。

3. 分化:培養24小時后,將MSC  NutriStem® XF培養基吸除,每孔加入0.2ml分化培養基。

4. 置于37°C,5% CO2培養箱中培養14-21天。
注意:培養時間長,將得到更成熟的軟骨細胞(Alcian Blue染色強度更大)。

5. 每3-4天更換分化培養基(0.2ml/well)。
注意:小心不要吸入球狀體。


 
如何更好地鑒別MSC分化能力?

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