認知障礙是多發性硬化癥（MS）的一種常見癥狀，嚴重影響患者的生活質量。由于沒有既定的治療方法，尋找預防或減緩認知能力下降的可變因素尤為重要。低水平維生素D、吸煙和抗人類皰疹病毒（EBV）核抗原1（EBNA-1）的抗體升高是目前已知的幾種MS風險因子。然而，關于這些MS風險因子能否明確預測MS患者的長期認知狀態，目前尚未進行過較為深入的探討。

來自美國哈佛大學公共衛生學院的科學家們探究了維生素D、吸煙和抗EBNA-1抗體濃度是否能預測MS患者的長期認知狀態和神經元損傷。

本研究利用Simoa（Single Molecular Array）技術對神經軸突損傷標志物進行定量檢測。Simoa技術是由美國Quanterix公司研發生產的一款超高靈敏度單分子蛋白質檢測技術，其靈敏度為傳統ELISA技術的1000倍以上，檢測下限達到fg/mL，為血清/血漿中實時監控這些標志物提供了技術支撐，改變了腦損傷和神經退行性疾病的診斷方式。







First published April 16, 2020

發表期刊：Neurology；IF=8.689

原文鏈接：https://n.neurology.org/content/94/18/e1950.long

研究背景
該研究團隊之前報道過在接受了臨床BENEFIT治療（使用Betaferon/Betaseron用于新發MS的初始治療）的患者中，治療后1或2年內維生素D水平較高的患者在后續的5年隨訪中活動性病變和腦萎縮的發生率較低。

在本研究中，研究人員將隨訪時間延長至11年，并在復發緩解性MS首次復發早期探討維生素D、吸煙和抗EBNA -1抗體是否有助于預測獨立于疾病治療的長期認知功能和神經軸突完整性。本研究采用盲法隨訪5年，隨后觀察至8.7年，然后在第11年進行評估，以評估早期治療的長期效果。

樣本
BENEFIT（clinicaltrials.gov: NCT00185211）是一個多中心雙盲三期臨床試驗（早期治療組和延遲治療組），這項實驗包括468名接受了干擾素β-1b（INFβ-1b）治療，且首次臨床發作提示MS的臨床孤立綜合征患者（CIS）。本研究是在完成11年持續治療的278名患者中進行的（BENEFIT11:NCT01795872）。第11年進行評估時, 這278名患者中有61.5%接受了疾病緩解治療。

研究方法

一、血清中維生素D、吸煙和EBV感染相關生物標志物的檢測
在基線期和第6、12和24個月收集血清并檢測所有生物標志物，此外還檢測第54個月、第60個月以及第11年采集的血清中的維生素D。

1.  25-羥基維生素D （25（OH）D）是維生素D營養狀態的首選生物標志物，本研究對25（OH）D進行檢測，針對前24個月收集的樣本，采用ELISA方法進行分析；24個月之后收集的樣本采用化學發光免疫分析法進行分析。

2.  采用ELISA方法對抗EBNA-1的免疫球蛋白G （IgG）水平進行了定量，作為過去EBV感染史的檢測；如果EBNA-1抗體呈陰性，對病毒衣殼抗原(VCA)的IgG進行定量，來作為急性感染EBV的檢測。

3.  尼古丁代謝物可替寧是當前或近期使用煙草的生物標記物，與吸煙數量相關，該研究也是采用ELISA對可替寧進行檢測。通常吸煙者體內可替寧>25ng/mL，而非吸煙者低于10 ng/mL。

二、認知功能與神經元完整性研究
認知功能通過同步聽覺系列加法測驗（PASAT）進行評估。PASAT是一種針對認知功能的評估方式，主要通過測試聽覺信息處理的速度和靈活性，以及計算能力，最后通過測試分數反映受試者的認知功能狀態。

該研究使用Simoa法，以第1年和第11年為基線，測定了36個血清樣本的神經絲輕鏈蛋白（NfL）濃度。血清NfL是神經軸突損傷的生物標志物，與腦脊液NfL密切相關。

根據性別、基線年齡、治療分配、類固醇治療、多灶癥狀、T2病變和體質指數（BMI）調整線性和logistic回歸模型。

結論
25(OH)D較高的患者BMI較低，基線T2病變較少；抗EBNA -1滴度較高的個體和吸煙者中男性比例較高。13.8%的受試者從基線到第11年間服用維生素D補充劑�；�線期NfL和第一年的NfL均與第11年的PASAT無關。與基線相比，第一年的NfL與第11年的NfL的相關性更強（表1）。

表1：278名參與者的基線特征:在前24個月內平均25(OH)D的五分位數，基線EBNA-1 IgG抗體滴度的四分位數，以及基線可替寧水平

一、長期認知功能研究
1. CIS發生后的前幾年里，體內25(OH)D較高的患者在第11年PASAT測試中的得分低于中位數的可能性較小。（如圖）

Figure. 根據癥狀出現后24個月和60個月內平均25(OH)D五分位數，臨床分離綜合征11年后PASAT(中位得分56分或以下)認知能力較差的比值比(OR)和95%置信區間(CIs)

2. 在線性模型中，吸煙者往往具有長期認知能力較差的表現，對應于臨床意義上的PASAT的5.4點，且在重度吸煙者的患者中最為明顯（表2）。

表2：CIS后11年PASAT評估血清可替寧水平(吸煙的生物標志物)和長期認知能力

二、長期神經軸突完整性研究
長期神經完整性與長期認知表現存在聯系。前24個月或60個月25(OH)D平均水平升高50 nmol/L與血清NfL降低20%相關，表明第11年神經軸突損傷更少（表4）。此外，在發病后24個月內吸煙與第11年時NfL升高20%有關（表4）。

表4：CIS患者血清NfL濃度測定血清25-羥基維生素D (25(OH)D)、可替寧和EBNA-1抗體水平和長期神經軸突損傷

小結
根據PASAT的評估，臨床MS發病后較高的25(OH)D水平預示著更好的認知功能，而在病程11年后較低的NfL水平則預示著充足的維生素D水平可能有助于MS患者的長期神經保護。與不吸煙者相比，吸煙者在PASAT測試中的長期認知得分更低，而在NfL中得分更高。相比之下，EBV血清學標記物不能預測認知表現或NfL濃度。

本研究的結論更一步證實了NfL可能是臨床MS研究的一個有效的生物標志物。

綜上所述，臨床MS發病后較低的維生素D水平和吸煙預示了MS患者長期認知功能和神經元完整性較差；提示臨床多發性硬化癥發病后糾正維生素D不足和戒煙可保護長期認知功能和中樞神經系統的完整性。

因此可以在CIS和MS患者中常規考慮補充維生素D，特別是那些維生素D水平不足的患者，鼓勵和幫助病人戒煙仍然至關重要。

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