在應對病毒性大流行疾病時，為了有效控制病毒傳播和減少感染人群，快速且可靠的診斷是至關重要的。那么目前檢測COVID-19的 "黃金標準 "依賴于一種成熟的技術，即反轉錄定量聚合酶鏈反應，也叫RT-qPCR。簡而言之，這一程序包括RNA提取、逆轉錄成互補DNA或cDNA，以及用熱循環(huán)儀對轉錄本（病毒基因組的特異性）進行實時定量。

為了早期檢測和診斷，實時熒光定量PCR儀必須能夠檢測非常少量的病毒RNA。研究表明，檢測限(LOD)或以>95%置信度檢測到的最低RNA濃度，表示每1μL可能只有1拷貝的病毒RNA。因此，我們準備用COVID-19 RNA來確定Azure Cielo™的LOD。
 

材料和方法

Azure Cielo™ 實時熒光定量PCR系統(tǒng)的LOD或分析靈敏度使用FDA批準的COVID-19 genesig® Real-Time PCR assay進行檢測，如使用說明書（IFU）所述。使用試劑盒提供的陽性對照模板（PCT）生成6點標準曲線，如下所示：
 

▲ 表1. PCT系列稀釋液
 

SARS-CoV-2全基因組RNA從歐洲病毒全球檔案館（EvaG）獲得，并按照IFU中的描述進行連續(xù)稀釋，每個稀釋液進行20次重復。
 

結果和討論

通過表1的PCT稀釋液得到標準曲線（圖1），將病毒RNA/μL的拷貝數與Cq值關聯(lián)起來。
 

▲ 圖1. 標準曲線
 

數據顯示，在12.5cp/μL、1.25cp/μL和0.625cp/μL時，Azure Cielo™ 實時熒光定量PCR系統(tǒng)均檢測到20/20（100%）的重復，Cq平均值分別是30.49（圖2，綠色）、33.66（圖2，黃色）和34.80（圖2，橙色）。在0.06cp/μL時，檢測到12/20（60%）的重復，Cq平均值37.12（圖2，紅色）。
 

▲ 圖2. 病毒拷貝數與Cq值的關系

結果表明，針對SARS-CoV-2 RNA的檢測，Azure Cielo™實時熒光定量PCR系統(tǒng)的最低檢測限LOD為0.625cp/μL，表明Azure Cielo™ 實時熒光定量PCR系統(tǒng)可用于快速可靠地檢測COVID-19。

Azure Cielo™實時熒光定量PCR系統(tǒng)

Azure Cielo™實時熒光定量PCR系統(tǒng)來自于美國Azure Biosystems公司，配備高品質溫度模塊，采用光纖和CMOS的檢測系統(tǒng)，高能LED的激發(fā)，提供高靈敏和可靠的數據。