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naica®微滴芯片數字PCR在新冠病毒母嬰垂直傳播研究的應用

瀏覽次數:1334 發布日期:2022-3-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

最近,人們發現新冠病毒SARS-CoV-2有可能在母嬰之間進行垂直傳播,而這種傳播的后果,無論是胎兒還是新生兒,均尚不清楚。來自法國艾克斯-馬賽大學的科學家在《Clinical Infectious Diseases》雜志上發表了一篇名為Congenital Infection of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 With Intrauterine Fetal Death: A Clinicopathological Study With Molecular Analysis 的文章,該文章是關于SARS-CoV- 2因母胎傳播而繼發胎死腹中并伴有先天性感染,胎盤和胎兒組織損傷的第一篇報道。

文中采取個案研究的方式,來自于一個SARS-CoV-2孕中期先天性感染的病例。一名孕婦在SARS-CoV-2檢測呈陽性后入院觀察。隨后檢測到胎兒只有少量運動,羊水正常,胎盤形態正常。第二天,患者出現失血,胎兒運動減少。在超聲檢查中未發現胎兒心臟活動。在引產后,這對夫婦提出并同意了胎兒和胎盤的病理學檢查。后續采用免疫化學,RT-qPCR和RT-dPCR對胎兒和胎盤進行病理學檢查和SARS-CoV-2基因組變異分析。

為了提高SARS-CoV-2基因組檢測的靈敏度,文中作者采用naica®微滴芯片數字PCR系統進行檢測。在SARS-CoV-2病毒RNA的3個特異性區域設計引物和雙標記探針:NI和N2為N基因,IP2為RdRP基因。均在FAM通道中檢測熒光信號,可以提高檢測的敏感性和特異性,在HEX通道中測量的人類基因被用作內部控制來驗證樣本的存在。

▲利用RT-dPCR技術,從陽性對照(PAC)、固定肺組織和胎盤檢測SARS-CoV-2病毒載量的2D微滴圖。(A)HEX通道的陽性微滴檢測內源性細胞。(B)FAM通道檢測3個SARS-CoV-2靶點。(C)在FAM通道和HEX通道均可以檢測到內源性細胞和SARS-CoV-2靶點。(D)陰性微滴

通過臨床病理學和分子水平的綜合分析,結果表明:胎盤發生組織學病變,出現組織細胞間炎癥和滋養層細胞壞死。胎兒表現出輕微的生長限制,出現肝細胞損傷和含鐵血黃素沉著癥,在胎兒組織中沒有發現炎癥細胞,在福爾馬林固定胎盤、冷凍胎盤標本和胎兒肺和肝樣品中均檢測到SARS-CoV-2,在福爾馬林固定胎盤組織中檢測到最高的病毒載量。

本案例中,SARS-CoV-2孕中期先天性感染,伴有子宮內胎兒死亡,繼發于SARS-CoV-2感染的極度彌漫性胎盤損傷特征。母胎交換嚴重受損,導致胎兒缺氧伴心力衰竭和胎盤組織中高水平的病毒RNA。因此,在疑似SARS-CoV-2垂直傳播的病例中,應考慮對孕婦進行產科急診管理,特別是存在血小板減少癥導致胎兒移動減少的情況下。

原文鏈接:https://doi.org/10.1093/cid/ciab840

發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
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