利用pFastBac1進行目的蛋白的表達的時候，根據蛋白純化方式的需要以及融合表達目的蛋白以提高其表達量的需要，可以在質粒構建時添加His標簽或GST標簽。為了防止額外添加的His和GST等蛋白標簽影響目的蛋白的生物學功能和結構研究，可在融合蛋白和標簽之間添加蛋白酶酶切位點，如TEV或PreScission的酶切位點。如果蛋白主要以可溶形式表達，離心收集昆蟲細胞，超聲裂解細胞，但由于昆蟲細胞內蛋白酶種類比較多，需要添加各種蛋白酶抑制劑。離心收集超聲后上清，使用鎳柱或GST柱等純化目的蛋白。同時可以利用離子交換、分子篩層析等進一步純化目的蛋白。純化獲得的蛋白，可以添加適量甘油后保存，或者如果有需要也可以適當濃縮后保存等。
蛋白表達純化詳細步驟：

一、桿狀病毒制備與鑒定
培養昆蟲細胞至密度達到5×10⁶~1×10⁷活細胞/ml，活性≥90%。用培養基將細胞稀釋成2.5×10⁶活細胞/ml 稀釋液，27℃、127 r/min 恢復25 min。用Opti⁃MEM^TMI 無血清培養基稀釋 ExpiFectamine^TMSf 轉染試劑，并加入 Bacmid DNA（pc1⁃mfp5以及gus），室溫孵育5 min，隨后滴加到100 ml細胞稀釋液中。27℃、127 r/min孵育72~96 h至細胞存活率降至 60%~80%，300×g 離心 5 min，保留上清即P0代病毒。
使用 ExpiSf^TMCD 培養基制備連續 10 倍的病毒稀釋液（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5），并在培養基中將細胞稀釋至1.25×10⁶活細胞/ml。將1 ml 病毒稀釋液添加到24深孔板中（每個稀釋液1孔），隨后將1 ml ExpiSf^TMCD培養基添加到無病毒的陰性對照中。將800 μl細胞懸液添加到8個病毒稀釋液以及陰性對照孔中，并在27℃、227 r/min 搖床中避光孵育14~16 h。將24深孔板中細胞分別取出，300×g離心5 min，棄上清。細胞沉淀重懸于100 μl 稀釋的gp64APC抗體中，渦旋 3~5 s，室溫孵育 30 min，PBS洗滌后重懸于1 ml胎牛血清稀釋液中，通過流式細胞儀進行鑒定。

二、蛋白表達與鑒定
培養細胞至細胞密度達到 5×10⁶~1×10⁷活細胞/ml，活性≥90%，用培養基稀釋至最終密度為5×10⁶活細胞/ml，立即加入ExpiSf^TM轉染增強劑，在127 r/min，27℃搖床上孵育18~24 h。當細胞密度恢復至5×10⁶~7×10⁶活細胞/ml，活性≥80%時分別使用病毒感染復數（multiplicity of infection，MOI，平均每個細胞的病毒感染數）30、60 以及 120的桿狀病毒感染細胞，27℃、127 r/min培養直至細胞活性降至30%以下，300×g離心5min取上清。取200 μl細胞上清液以及細胞裂解液分別加入50 μl 5×SDS緩沖液，沸水煮6 min，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，在90 V、90 min的狀態下電轉至醋酸纖維膜上。5% 脫脂奶粉封閉1 h，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳驗證目的蛋白的表達情況”，純化之后還可以通過SDS-PAGE驗證，結合灰度分析驗證蛋白的純度
 
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