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Opentrons Flex 自動化移液工作站在制備質(zhì)粒文庫中的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):982 發(fā)布日期:2024-5-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負
高通量基因組分析是生命科學(xué)研究中不可或缺的重要工具,這項技術(shù)在推動科研進步方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。為了滿足科研領(lǐng)域?qū)Ω咝А蚀_制備方法的迫切需求,seqWell 的 Express PlexTM Library Kit 提供了一種專門用于高通量制備質(zhì)粒和擴增子文庫的解決方案。
 
在傳統(tǒng)的手工制備文庫方法中,完成 96 個樣品的制備需要耗費長達 90 分鐘的時間,其中手動操作時間占據(jù)了 30 分鐘。這種方式不僅效率低下,還容易因為人為因素引入誤差。
 
為了改進這一狀況,本文對比了兩種文庫制備方法,一種是在 Opentrons Flex™ 移液工作站上使用 seqWell ExpressPlex™ Library Kit ,另一種是手工制備文庫。
 
通過結(jié)合 Flex 移液工作站與 seqWell ExpressPlex™ Library Kit,我們可以顯著縮短文庫制備時間,提高樣本通量。這種自動化的解決方案不僅提升了制備效率,還降低了產(chǎn)生人為誤差的風(fēng)險,為生命科學(xué)研究提供了更為可靠、高效的工具。
 
材料與方法
根據(jù) Express Plex 的工作流程,我們在 Flex 自動化移液工作站上進行文庫制備。實驗過程中,我們輸入 16 ng 的 pUC19 ,再將所有組分加入反應(yīng)板 , 用 3000 rpm 的轉(zhuǎn)速混勻 90 秒,然后進行后續(xù)的文庫制備和混合步驟。之后在 NextSeq 2000 測序儀上對最終的文庫進行 2X150 bp 測序。
 
工作流程展示
A)ExpressPlex 工作流程包括將 index 和 DNA 加入反應(yīng)板(已含有酶等混合物),然后進行擴增、混合和 MAGwise 磁珠純化;
B)Flex 工作站包括吸頭盒、模塊、轉(zhuǎn)板抓手和其他配件;
C)Flex 工作站板位設(shè)置,用于在擴增后將 4 個反應(yīng)板進行文庫混合。
 
應(yīng)用實驗結(jié)果
 
A)結(jié)果顯示 96 孔板中文庫 Read Count 變異系數(shù)(CV)為 12.7%;
B)95% 的文庫數(shù)據(jù)通過了數(shù)據(jù)預(yù)處理,為高質(zhì)量數(shù)據(jù),且超過 90% 文庫質(zhì)量得分達到 Q30;
C)由 Flex 制備的文庫比手動制備的文庫濃度更高。
 
利用錯開的開始時間,可以在 Opentrons FlexTM 上 3 小時內(nèi)制備 8 個獨立的 96 混 1 文庫。在 Flex 上設(shè)置第一塊反應(yīng)板后,可以在 24 小時內(nèi)完成 768 個文庫的制備。
 
應(yīng)用實驗結(jié)論
在 Flex 移液工作站上制備的 96 個 pUC19 質(zhì)粒樣本文庫呈現(xiàn)出了高度均一的質(zhì)量,充分證明了 Flex 平臺在自動化文庫制備方面的卓越性能。
 
與手動制備相比,自動化文庫制備不僅穩(wěn)定性更佳,而且文庫濃度更高。此外,超過 95% 的讀數(shù)成功通過測序儀質(zhì)檢 PF,這進一步驗證了自動化制備流程的高效性和準確性。
 
Flex 移液工作站支持在單次運行中處理多達 384 個樣本,極大地提高了樣本處理效率。通過合理安排時間,我們甚至可以在 24 小時內(nèi)處理高達 768 個樣本,從而滿足大規(guī)模高通量基因組分析的需求。
在 Flex 平臺上進行自動化 ExpressPlex™ Library Prep Kit 工作流程,我們實現(xiàn)了從提取的質(zhì)粒/擴增子DNA 到數(shù)據(jù)生成的全流程自動化。這一解決方案不僅簡化了操作步驟,降低了人為誤差,而且顯著提高了實驗效率和數(shù)據(jù)質(zhì)量,為生命科學(xué)研究領(lǐng)域的發(fā)展注入了新的動力。
 
參考文獻
1. ExpressPlex™  Library Prep Kit Single-Step Workflow Demo for High-Throughput
Multiplexed Sample Prep. (2023). YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=gB4IsVH0AIA
2. Leonard, J. T., Feeley, R., Huang, S., Wang, L., & Smith, J. (n.d.). A transformational one-step library
preparation method for multiplexed plasmid and amplicon sequencing. Library Prep
Simplified through Scalable Workflows | seqWell. https://seqwell.com/wp-content
uploads/2022/06/20220519_ ExpressPlex-Poster.pdf
3. Leonard, J. T., Huang, S., Feeley, R., Couture, J., Palys, J., Smith, J., & Liu, Y. (n.d.). An Optimal Strategy for Internalizing Ultra-high Throughput Plasmid Sequencing. Library Prep Simplified through
Scalable Workflows | seqWell. https://seqwell.com/wp-content/uploads/2023/05/SW2023_Optimal- Strategy-HTP-Sequencing-11x8.5-05192023.pdf
4. Palys, J., Pearson, A., Whitmore, I., & Rees, H. (2023). High-Throughput NGS Library Prep for Plasmids and Amplicons with the ExpressPlex™ Library Preparation Kit on the SPT Labtech firefly®.
5. SeqWell Inc. (2023). ExpressPlex™ Library Prep Kit. Library Prep Simplified through Scalable     Workflows | seqWell. https://seqwell.com/wp-content/uploads/2023/04/SW2023_ExpressPlex- Product-Flyer-04202023.pdf
發(fā)布者:合創(chuàng)生物工程(深圳)有限公司
聯(lián)系電話:0755-26417273
E-mail:marketing.china@opentrons.com

標簽: 移液工作站
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