聯(lián)科生物凋亡試劑盒AP101檢測步驟
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聯(lián)科生物凋亡檢測試劑盒（Annexin V/PI apoptosis kit，Cat#：AP101）是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。可以使用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或其他熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。 本試劑盒還提供了碘化丙啶（PI）染色液，PI可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同時期的細(xì)胞區(qū)分開來。 試劑盒組分
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樣品處理 |
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(1)、用合適的方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡； (2)、懸浮細(xì)胞離心（1500rpm 離心 5min）收集；貼壁細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消化并用含血清培養(yǎng)基洗一次（注：胰酶消化時間不易過長，否則容易引起假陽性）；或直接用Accutase酶消化（無需終止）；1500rpm 離心 5min收集細(xì)胞； (3)、用PBS洗滌細(xì)胞兩次（1500rpm離心5min）收集1-5 X105細(xì)胞，棄上清； (4)、制備1X Binding Buffer緩沖液：按10次分析的量計算，加1ml 5X Binding Buffer緩沖液到4ml的去離子水； (5)、用500ul 1X Binding Buffer重懸細(xì)胞(第4步稀釋的緩沖液） (6)、加入5ul annexin-V FITC和10ul PI (7)、避光室溫孵育5分鐘 (8)、上機(jī)檢測 | ||||||||||||||||||||
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流式檢測 |
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流式分析Annexin-V FITC（放射波長=488nm；吸收波長=530nm）用FITC信號檢測（通常是FL1通道）；PI染液用PE信號檢測（通常是FL2通道） | ||||||||||||||||||||
閱讀原文：http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014120007.html
