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牛子宮內膜上皮細胞 BEND使用說明

瀏覽次數:3013 發布日期:2017-11-9  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

 

細胞名稱

牛子宮內膜上皮細胞 BEND

 

 

 

CELLBIO 貨號

CBR-131460

 

 

動物種別

 

 

細胞數量

1X10^6

 

 

培養瓶規格

25T

 

 

傳代次數

2-3 代

 

 

穩定傳代次數

10-15 代

 

 

傳代方式

1:2 或 1:3 傳代

 

 

推薦培養方案

90%Hyclone DMEM 高糖

 

培養基;10% Gibco 胎牛

 

血清、1%-1.5%Cellbio 雙

 

 

 

培養溫度

37℃

 

 

二氧化碳濃度

5%

 

 

細胞純度

99%

 

 

支原體檢測

(-)

 

 

培養體系內毒素檢測

0.5EU/ml

 

 

 

細胞處理注意事項

 

1、收到細胞,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中

 

的問題,細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況,出現此狀態時,請不要打開細胞培養瓶,應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止 3-5 小時左右,讓細胞先穩定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

 

2、收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到 15%去培養。若細胞迏到 80%左右 ,血清濃度還是在 10%。

 

3、收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過 80%匯合度時,將培養瓶中培養基吸出,留下 5-10ML 培養基繼續培養:超過 80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液,1000 轉/分鐘離心 3 分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

 

4、24 小時后,細胞形態已恢復并貼滿瓶壁,即可傳代。(貼壁細胞)將培養瓶里的培養基倒去,加 3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加

 

0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化,消化時間以具體細胞為準,一般 1-3 分鐘,不超過 5 分鐘。可以放入 37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入 3-5ml

 

培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之完全脫落,然后將溶液吸入離心管內離心 1000rpm/5min。

 

棄上清,視細胞數量決定分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。

 

5、貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液培養。

 

發布者:上海一基實業有限公司
聯系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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