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草魚出血病I型病毒(GCRV I) 核酸檢測試劑盒(一管式恒溫熒光法)使用說明書

瀏覽次數(shù):3382 發(fā)布日期:2018-6-15  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

草魚出血病I型病毒(GCRV I) 核酸檢測試劑盒(一管式恒溫熒光法)

產(chǎn)品說明

動物疫病檢測系列基于獨特的恒溫熒光檢測技術,可針對食品、動物組織等樣品中病毒的特異核酸片段進行擴增,通過實時擴增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于對草魚出血病I型病毒(GCRV I)的檢測,檢出限為103copies/μl基因組RNA

產(chǎn)品組成(96測試)

032081L

試劑

含量

A-GCRV I-I

  22μL× 96管

B-I

  90 μL × 2支

R-I

  12 μL × 2支

NG-I

  50 μL × 3支

PG-GCRV I-I

  50 μL × 2支

 

適用儀器

Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C等恒溫熒光檢測儀,ABI 7500,LightCycler480,CFX 96等熒光PCR儀。

自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管;②冰盒;③移液器(0.1-2.5μL,0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套滅菌吸頭;④離心機;⑤渦旋混勻器;⑥金屬浴

注意事項

1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。

   1)第一區(qū):樣本制備區(qū)。

 2)第二區(qū):模板添加區(qū)。

   3)第三區(qū):擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★分區(qū)之間最好進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。

2.實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。

3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。

4.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒。

5.反應結(jié)束后,擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。

6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。

樣品處理

參照《SN/T 3584-2013 草魚出血病檢疫技術規(guī)范》或其他標準處理樣品,制備的樣本保存待用。

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

實驗操作

1. 模板制備(樣本制備區(qū))

建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2.添加模板(模板添加區(qū),放置于冰盒中進行)

     取出所需測試數(shù)的已含有反應液的PCR管,將試劑完全解凍,解凍后打開管蓋向各管管底分別加入0.8 μL B-I及0.2μL R-I,蓋上管蓋離心1 min。打開管蓋分別沿各管管壁上加入2μL模板,順序為NG-I、待測樣品模板、PG- GCRV I -I。蓋好PCR管蓋后,離心3 min,立即進行PCR擴增反應。

3. 擴增反應(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))

①恒溫儀器63℃條件下反應45 min。

②若使用熒光定量PCR儀,則熒光基團選擇FAM,淬滅基團選擇None,將63℃ 15 s,63℃ 45 s作為一個循環(huán),于63℃ 45 s處收集熒光信號,45個循環(huán)。 

其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

結(jié)果判定

①儀器自動判定結(jié)果,若顯示“陽性”,則樣品中含有草魚出血病I型病毒(GCRV I);若顯示“陰性”,則樣品中不含有對草魚出血病I型病毒(GCRV I)或含量低于檢出限。如在40min~45min間出現(xiàn)曲線上揚而自動判讀結(jié)果為陰性,可能由于樣品含量較低導致,建議對樣品進行富集或延長反應時間至60min進行復核。

②在熒光定量PCR儀上,根據(jù)有無“S”型擴增曲線判定結(jié)果。若有“S”型擴增曲線,則樣品中含有草魚出血病I型病毒(GCRV I);若無“S”型擴增曲線,則樣品中不含有草魚出血病I型病毒(GCRV I)或含量低于檢測限。

  • NG反應管結(jié)果顯示“陰性”,PG反應管結(jié)果顯示“陽性”,此次檢測結(jié)果有效,否則無效。如重復檢測結(jié)果仍為無效,請與技術支持人員聯(lián)系。
發(fā)布者:上海一基實業(yè)有限公司
聯(lián)系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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