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手把手教您給細胞染色

瀏覽次數(shù):9024 發(fā)布日期:2019-8-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

細胞凋亡、細胞計數(shù)都會用到細胞染色
今天我們就聊聊:
新手入門
如何輕松搞定細胞染色,
給你的細胞一個精致瑞麗的妝容?


細胞骨架的熒光染色


臺 盼 藍 染 色

臺盼藍染色是細胞培養(yǎng)常見的實驗,用于細胞計數(shù),檢測細胞活性。健康的正常細胞能夠排斥臺盼藍,而死亡的細胞,膜的完整性喪失,通透性增加,細胞可被臺盼藍染成藍色。
 

小鼠胚胎干細胞臺盼藍染色


三步輕松搞定臺盼藍染色:
1、胰酶消化貼壁細胞,制備單細胞懸液,并作適當稀釋(10細胞/ml)。
2、染色:細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。
3、計數(shù):在三分鐘內,用計數(shù)板分別計數(shù)活細胞和死細胞 。 


臺盼藍染色看起來so easy,但新手入門還是需要注意:
1、染色時間不能太長,否則活細胞也會逐漸積累染料而染成顏色,使檢測結果偏離。
2、可結合細胞計數(shù)方法,同時進行細胞計數(shù)和活力檢測。
3、有潛在致癌危險,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

BI臺盼藍染液

 

細胞免疫熒光染色

熒光顯微鏡技術,不僅用于研究蛋白結構,對細胞凋亡檢測也具有重要意義。常用的包括:Hoechst、碘化丙啶(Propidium-Iodide,PI)、annexin-v、JC-1、鈣黃綠素-AM等方法。

hoechst染色,紫外光下核染為藍色

hoechst可以穿過活細胞膜與細胞核結合,有hoechest33342和hoechst33258兩種,區(qū)別不大。但是hoechst33342對細胞的毒性作用更小一些,所以一般hoechsts33258用于細胞固定后再染色,而hoechst33342則可以對活細胞直接進行染色!

PI單一染色觀測培養(yǎng)細胞,只能表示細胞的壞死情況,而不是凋亡(當然晚期凋亡PI亦可著色)。但是如果您只是想知道細胞的死亡情況,而不是仔細區(qū)分壞死或凋亡,那么PI單一染色也可以。

JC-1染色非常簡單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液(1~5mg/ml),儲存于-20℃,用時以培養(yǎng)液稀釋至10ug/ml 終濃度。對貼壁細胞可以直接棄去培養(yǎng)液,漂洗細胞后直接加入染色液,10~30 min后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀察。用于懸浮細胞時還可以通過流式細胞儀進行檢測,收集紅/綠信號強度,計算其強度比。

總結


(素材來源于網絡)
 

·END·


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