熒光染料是細胞生物學等科學研究中不可或缺的重要工具，熒光濾色塊是熒光顯微鏡中至關重要的一個部件。我們大家在操作熒光染料亮度的時候，我們可以按照上面的比較方法去比較熒光染料的亮度，那么一般熒光染料亮度怎么進行比較?

 

       熒光染料的亮度可以用來比較不同熒光染料的熒光標記效果，通過陰性細胞群與陽性細胞群的熒光信號之間的關系來表示。但陰性細胞群的熒光信號受到信號強度、自發熒光、非特異性染色、儀器的電子噪聲等多個因素相關。

 

       熒光染料染色指數是陽性細胞群的平均熒光強度與陰性細胞群的平均熒光強度之差與陰性細胞群熒光強度標準差之間比值的一半。熒光染料染色系數只和抗體克隆與質量、熒光團純度與質量、熒光修飾比、激光線及其功率、長通和帶通濾光片、目的細胞等因素相關。

 

       熒光染料的染色指數與熒光染料的亮度呈正相關，也就是熒光染料亮度越高，染色系數也就高。

 

       DNA染料：

 

 

       圖1.用Cell Navigator™脂質液滴熒光測定試劑盒（Cat＃22735）和Nuclear Green™LCS1（Cat＃17540）染色的油酸處理過的HeLa細胞的熒光圖像。

 

染料名稱	標記部位	激光	濾光片組	亮度
DAPI（17510）	DNA	355 nm	DAPI	6
Nuclear Blue（17548）	DNA	355 nm	DAPI	6
Nuclear Green（17540）	DNA	488 nm	FITC	6
Nuclear Orange（17541）	DNA	488 nm	Cy3	6
Propidium Iodide（17515）	DNA	532 nm	Texas Red	3
Nuclear Red（17542）	DNA	633 nm	Cy5.5	6

 

       細胞增殖染料：

 

 

       圖2.用CytoTell™Green和CFSE進行的細胞增殖測定。在第0天，用CytoTell™Green或CFSE對Jurkat細胞（〜2×106細胞/ mL）進行染色。在指定的那天，以1：1的比例連續通過細胞。在通過當天，在FITC通道中用ACEA NovoCyte 3000流式細胞儀測量熒光強度。連續幾代人以不同的顏色代表。

 

染料名稱	功能	激光	濾光片	亮度
CytoTell Blue（22251）	增殖	405 nm	DAPI	6
CFSE（22022）	增殖	488 nm	FITC	7
CytoTell Green（22253）	增殖	488 nm	FITC	7
CytoTell Orange（22257）	增殖	488 nm	Cy3/TRITC	7
CytoTell UltraGreen（22240）	增殖	488 nm	FITC	7
CytoTell Red 590（22261）	增殖	561 nm	Cy3	7
CytoTell Red 650（22255）	增殖	633 nm	Cy5	7

       細胞活力檢測染料

 

 

       圖3.用CytoCalcein Violet 500（Cat＃22013）染色的活HeLa細胞圖像。細胞核用Hoechst 33342（Blue，Cat＃17535）染色。

 

染料名稱	功能	激光	濾光片	亮度
Calcein Blue（22006）	細胞活力	405 nm	DAPI	6
Calcein UltraBlue（21908）	細胞活力	405 nm	DAPI	6
CytoCalcein Violet 450（22012）	細胞活力	405 nm	DAPI	7
CytoCalcein Violet 500（22013）	細胞活力	405 nm	FITC	7
Calcein（22001）	細胞活力	488 nm	FITC	7
Calcein Orange（22008）	細胞活力	488 nm	TRITC	7
Calcein UltraGreen（21905）	細胞活力	488 nm	FITC	7
7-AAD（17501）	細胞活力	532 nm	Cy5	2
Calcein Red（21900）	細胞活力	561nm	Cy3/TRITC	7
Calcein Deep Red（21902）	細胞活力	633 nm	Cy5	7

 

       熒光標記染料

 

       圖4.將 HeLa細胞與（Tubulin +）或不與（Tubulin-）小鼠抗微管蛋白一起孵育，然后與iFluor™488山羊抗小鼠IgG綴合物（綠色，左）或AlexaFluor®488山羊抗小鼠IgG綴合物（綠色，右）。細胞核用Hoechst 33342（藍色）染色。

 

染料名稱	功能	激光	濾光片	亮度
Alexa Fluor 350	標記	355 nm	DAPI	2
iFluor 350（1020）	標記	355 nm	DAPI	6
iFluor 450（1026）	標記	405 nm	FITC	5
Pacific Green	標記	405 nm	FITC	5
Pacific Orange	標記	405 nm	TRITC	2
iFluor 405（1021）	標記	405 nm	DAPI	6
iFluor 430（1052）	標記	405 nm	FITC	6
Pacific Blue（570）	標記	405 nm	DAPI	2
Alexa Fluor 555	標記	488 nm	TRITC	4
Cy3（141）	標記	488 nm	TRITC	4
Alexa Fluor 488（1812）	標記	488 nm	FITC	5
FITC	標記	488 nm	FITC	7
iFluor 488（1023）	標記	488 nm	FITC	7
Oregon Green	標記	488 nm	FITC	7
TRITC	標記	488 nm	TRITC	7
PE-Alexa Fluor 594	標記	488 nm	Texas Red	9
PE-Alexa Fluor 750	標記	488 nm	Cy7	9
PE-iFluor 594（2584）	標記	488 nm	Texas Red	9
PE-iFluor 750（2578）	標記	488 nm	Cy7	9
PE（2558）	標記	488 nm	TRITC	10
PE-Alexa Fluor 647	標記	488 nm	Cy5	7
PE-Cy5（2610）	標記	488 nm	Cy5.5	10
PE-Cy5.5（2613）	標記	488 nm	Cy5.5	7
PE-Cy7（2616）	標記	488 nm	Cy7	10
PE-iFluor 647（2577）	標記	488 nm	Cy5	10
PE-Texas Red（2619）	標記	488 nm	Texas Red	10
Alexa Fluor 555（1821）	標記	532 nm	TRITC	5
Alexa Fluor 532（1819）	標記	532 nm	TRITC	7
iFluor 514（1024）	標記	532 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 532（1025）	標記	532 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 546（1048）	標記	532 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
Alexa Fluor 594（1830）	標記	561 nm	Texas Red	6
iFluor 610（1038）	標記	561 nm	Texas Red (610/40)	6
Texas Red（480）	標記	561 nm	Texas Red	6
iFluor 555（1028）	標記	561 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 568（1049）	標記	561 nm	Cy3/TRITC (590/40)	7
iFluor 594（1029）	標記	561 nm	Texas Red (610/40)	7
Alexa Fluor 750（1839）	標記	633 nm	Cy7	4
iFluor 750（1037）	標記	633 nm	Cy7 (780/60)	4
iFluor 680（1035）	標記	633 nm	Custom (712/25)	5
Alexa Fluor 680（1835）	標記	633 nm	Cy5.5	6
Alexa Fluor 700（1836）	標記	633 nm	Cy7	6
Cy7（290）	標記	633 nm	Cy7	6
iFluor 647（1031）	標記	633 nm	Cy5 (660/40)	6
iFluor 660（1032）	標記	633 nm	Cy5 (660/40)	6
iFluor 700（1036）	標記	633 nm	Custom (712/25)	6
Alexa Fluor 647（1833）	標記	633 nm	Cy5	7
Cy5（151）	標記	633 nm	Cy5	7
iFluor 633（1030）	標記	633 nm	Cy5 (660/40)	7
APC-Alexa Fluor 750	標記	633 nm	Cy7	8
APC-Cy5.5（2622）	標記	633 nm	Cy5.5	8
APC-Cy7（2625）	標記	633 nm	Cy7	5
APC-iFluor 700（2570）	標記	633 nm	Cy7	8
APC-iFluor 750（16908）	標記	633 nm	Cy7	8
APC（2554）	標記	633 nm	Cy5	9
iFluor 790（1368）	標記	633 nm	Cy7 (780/60)	3
iFluor 800（1379）	標記	633 nm	Custom (840/20)	3
iFluor 810（1389）	標記	633 nm	Custom (840/20)	3
iFluor 820（1399）	標記	633 nm	Custom (840/20)	3
iFluor 860（1409）	標記	633 nm	Custom (885/40)	3

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