91成人国产网站在线观看_久久久久亚洲av成人毛片韩_国产偷窥真人视频在线观看_乳揉みま痴汉电车中文字幕_欧美日韩精品一区二区三区_九色视频网站

English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁(yè) > 技術(shù)文章 > Ficoll密度梯度離心法分離PBMC

Ficoll密度梯度離心法分離PBMC

瀏覽次數(shù):3705 發(fā)布日期:2022-6-22  來(lái)源:匯智和源
外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)、單核細(xì)胞(Monocyte)、樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)和其他少量細(xì)胞。
 
1     原理
單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與外周血其它細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞的比重超過(guò)1.080,單個(gè)核細(xì)胞的比重為1.070左右,血小板為1.030左右。因此,可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。
Ficoll密度梯度離心法是分離、純化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚體,中性,平均分子量400000,當(dāng)密度為1.2g/mL,未超出正常生理性滲透壓,也不穿過(guò)生物膜,故常用作PBMC分離的分離液。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分離液比重,離心后漂浮于分離液的液面上,也可有少部分細(xì)胞懸浮在分離液中。吸取分層液液面上的白膜層細(xì)胞,并進(jìn)行適當(dāng)?shù)那逑矗涂蓮耐庵苎蟹蛛x到較高純度的單個(gè)核細(xì)胞,即PBMC。
 
2     方法
1) 取新鮮抗凝全血,按照1:1比例加入1×稀釋洗滌液,將血液進(jìn)行稀釋(以降低血液粘稠度),輕柔混勻,備用。
2) 向無(wú)菌離心管內(nèi)加入適量的單個(gè)核細(xì)胞分離液,將稀釋后的血樣平鋪到分離液液面上方(分離液:稀釋全血=1:2),保持兩液面界面清晰。 
3) 800g,室溫,離心 20min-30min(注:設(shè)置較慢的加速度和減速度,如果有十檔,設(shè)為第三檔)。 
4) 離心結(jié)束后,吸棄血漿層,小心吸取PBMC層(即白膜層)并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后,管內(nèi)液面從上至下依次為稀釋血漿層、PBMC層、分離液層和紅細(xì)胞層(見(jiàn)圖1)。 
 

圖1 稀釋外周血離心前后的分層狀態(tài)圖
 
5) 向離心管中加入10mL 的1×稀釋洗滌液重懸細(xì)胞,250g,室溫離心 10min ,棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次,即可用于后續(xù)試驗(yàn)。
 
3     注意事項(xiàng)
1) 不同種屬動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞的比重有一定差異,請(qǐng)選擇合適的分離液進(jìn)行PBMC的分離。
2) 血液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,請(qǐng)盡量使用采集后24h內(nèi)的血液進(jìn)行PBMC分離。
3) 為保證細(xì)胞的活力,整個(gè)操作過(guò)程請(qǐng)輕柔,避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。
4) 為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期。
 
4     相關(guān)產(chǎn)品

發(fā)布者:匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司
聯(lián)系電話:400-127-6686
E-mail:support@iphasebio.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
評(píng)論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請(qǐng)輸入驗(yàn)證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 狠狠噜天天噜日日噜视频跳一跳 | 色啪视频 | 亚洲一区二区在线免费观看视频 | 亚洲sss综合天堂久久 | 国产日韩欧美东南在线 | 欧美丰满熟妇XXXX | 亚洲性av免费 | 这里只有久久精品 | 永久视频在线观看 | 国内外精品视频 | 岳的好大精品一区二区三区 | 日韩性爱视频 | 亚洲欧美成人A∨在线观看 亚洲一区二区福利视频 | 国产在线一二区 | 国产精品一久久香蕉国产线看观看 | 亚洲精品国产自在现线看 | 成人午夜小视频 | 国产91久久久久久 | 怡红院成人av | 毛片在线不卡 | 日本一卡二卡3卡四卡网站精品 | 妇女bbbb插插插视频 | 荫蒂每天被三个男人添视频 | 网站大全免费网址 | 国产精品欧美激情在线 | 97人人超碰国产精品最新O | 欧美精品一本久久男人的天堂 | 一区二区三区欧美 | 亚洲国产精品久久久久爰色欲 | 狂野欧美性猛交免费视频 | 国产偷久久久精品专区 | 亚洲一区二区在线免费 | 亚洲AV无码片一区二区三区 | 在线观看欧美激情 | 福利视频欧美一区二区三区 | 久久精品免费 | 国产视频一区二区 | www.色涩涩.com | 最新亚洲av日韩av二区 | 精品水蜜桃久久久久久久 | 国产一区二区三区在线看 |