牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一種球蛋白,包含607個氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用。
一、牛血清白蛋白的作用:
牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中,因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后,它可能起到“保護"或“載體"作用,不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言,牛血清白蛋白可以使酶切更完全,并可實現(xiàn)重復切割。在37℃,酶切反應超過1h時,牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定,因為在不含牛血清白蛋白的反應緩沖液中,許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學物質(zhì)。
二、牛血清白蛋白的成分:
1、蛋白質(zhì):是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白,球蛋白。纖維粘連素細胞促進細胞附著;α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促細胞附著;轉(zhuǎn)鐵蛋白能結(jié)合鐵離子,減少其毒性和被細胞利用。
2、多肽:血小板促生長因子能促細胞分裂,是多肽家庭的主要成員之一,是主要的促細胞增殖因子;成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經(jīng)細胞生長因子等,血清中含量雖很少,但對細胞生長也有一定作用。
3、激素:胰島素:促進細胞攝取葡萄糖和氨基酸,與促細胞分裂有關。類胰島素生長因子:能與細胞表達的胰島素受體結(jié)合,從而有胰島素同樣的作用。促生長激素:促細胞增殖效應。
4、其他成份:氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基意義不大。與蛋白相結(jié)合狀態(tài)的微量元素對細胞培養(yǎng)有意義。
三、關于牛血清白蛋白的常見問題:
1、標準牛血清白蛋白在應用時濃度要適宜,不可太高。牛血清白蛋白組分V現(xiàn)配現(xiàn)用,已經(jīng)配好的溶液即使是-20度保存一段時間后也會造成你的結(jié)果偏高.
2、牛血清白蛋白由熱容易凝固,當加熱到50°C或以上時,白蛋白相當迅速形成疏水性聚集體,不恢復到冷卻后的單體,在某種程度上低溫聚合預計也將會發(fā)生的,但是在相對較低的利率。
3、天然牛血清白蛋白(BSA)的等電點為4.6~5.8,經(jīng)無水乙二an(EDA)和碳化二亞胺(EDC)反應,改性后的牛血清白蛋白等電點為8.6。